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随着核与辐射技术快速发展及其在人类生活各方面的应用,人们受到辐射照射的潜在危险日渐增多。造血系统对辐射极其敏感,射线对造血干细胞(HSC, Hematopoietic stem cells)产生杀伤的同时,也对HSC赖以生存的造血微环境造成损伤。本课题选择活血中药复方——补肾抗衰片(BSKS, Bushen Kangshuai tablet),以期改善骨髓造血微环境,促进HSC自我更新,探讨BSKS在小鼠辐射损伤后造血重建中的作用。骨髓间充质干细胞(MSC, Mesenchymal stem cell)是造血微环境重要的基质细胞。本研究通过全骨髓贴壁法分离得到骨髓MSC,并根据其多向分化潜能进行成骨方向诱导,通过碱性磷酸酶(ALP, Alkaline phosphatase)活性检测及矿化结节茜素红染色对诱导培养的细胞进行鉴定,结果表明经诱导培养出来的细胞具备成骨细胞(OB, Osteoblasts)的表性特征和活性。根据OB来源于MSC这一特点,间接验证了全骨髓贴壁获取的细胞为MSC。本研究对接受6.0 Gy 137Cs-γ射线照射小鼠口服给予0.75 g/kg、1.5 g/kg、3.0g/kg体质量BSKS水溶液,检测与小鼠HSC、MSC增殖活力有关的脾结节(CFU-S, Colony forming unit of spleen)、成纤维细胞集落形成单位(CFU-F, Fibroblast colony-forming unit)、粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM, Granulocyte macrophage colony-forming unit)以及以MSC为饲养层的二维共培养粒-巨噬细胞集落形成单位(2D CFU-GM, Two dimension granulocyte macrophage colony-forming unit)等指标,观察BSKS对HSC以及骨髓造血微环境重要基质细胞MSC的保护作用。结果表明,BSKS可以促进CFU-S、CFU-GM克隆形成,即增强HSC增殖；BSKS促进CFU-F克隆形成,即增强MSC增殖能力；BSKS促进2D CFU-GM克隆形成,说明经BSKS作用后的MSC对HSC的增殖有促进作用。其中BSKS 1.5 g/kg剂量组效果比较明显。以BSKS 1.5 g/kg剂量组作为实验组,对照组给予同体积生理盐水,两组小鼠接受6.0 Gy 137Cs-γ射线照射后,对其进行骨髓病理组织学检查。结果发现,BSKS可以保护辐射损伤小鼠骨髓基质细胞和造血细胞,结果具有显著性差异。通过检测经2.0 Gy射线照射24 h及经6.0 Gy射线照射7 d后小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE, Polychromatic erythrocyte)微核发生率,观察BSKS对辐射后小鼠骨髓血细胞遗传损伤的保护及促进恢复作用的影响。结果显示,药物组(BSKS 1.5g/kg剂量组)微核率明显比照射对照组降低,结果具有显著性差异。接下来研究BSKS对辐射损伤小鼠外周血的影响。对小鼠进行6.0 Gy 137Cs-γ射线照射,检测外周血白细胞(WBC, White blood cell)、红细胞(RBC, Red blood cell)、血小板(PLT, Platelet)数目。结果显示,经γ射线照射7d后,BSKS对辐射损伤小鼠外周血WBC、RBC、PLT有升高作用,结果无显著性差异。通过MSC与骨髓细胞共移植,探究经BSKS作用的MSC对辐射损伤小鼠生存情况的影响。采用眼角静脉丛移植法,观察干细胞共移植后30天内小鼠的生存情况。结果表明,经BSKS作用的MSC与骨髓细胞共移植可以推迟小鼠出现死亡的时间,且小鼠的生存时间较对照组长。为进一步探究BSKS作用机制,本研究应用亚致死剂量照射小鼠急性辐射损伤模型,通过Western Blot法检测BSKS对小鼠骨髓MSC中造血相关因子Jaggedl表达水平的影响。结果显示,对照组和实验组均有Jaggedl阳性表达,而两组表达量并无显著性差异。