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铝佐剂是一种广泛使用的人、兽疫苗佐剂,主要包括氢氧化铝佐剂[AlO(OH)]、磷酸铝佐剂[Al(OH)x(PO4)y]和明矾佐剂[KAl(SO4)2·12H2O]三种,其中,氢氧化铝佐剂是世界上第一个被FDA认证的人用疫苗佐剂,已有90多年的应用历史。近年来,随着纳米技术的快速发展,纳米铝佐剂因具有颗粒尺寸小、比表面积大、表面能高、表面原子占比大等优点,使其在免疫刺激过程中具有优异的靶向效应和缓释作用。然而,纳米铝佐剂目前主要用于辅佐多肽、蛋白和病毒等抗原,而当其与菌苗类抗原结合时,则易引起免疫应答迟缓。铜绿假单胞菌是一种广泛存在的人、兽共患病原菌。随着多重耐药菌株数量的增加,许多临床分离株对碳青霉烯类或多粘菌素类抗生素具有耐药性,因此,这类由病原菌引起的感染急需新的方法进行治疗,而疫苗是一种理想的选择。本研究以铜绿假单胞菌PAO1为抗原,通过双连续反相微乳液法制备了棒状纳米氢氧化铝佐剂,并研究了棒状纳米氢氧化铝佐剂辅佐PAO1抗原的免疫学效价。主要研究内容和结论如下:(1)棒状纳米氢氧化铝佐剂的制备利用双连续反相微乳液法制备氢氧化铝颗粒。结果表明,反应条件为:pH值为8-11,反应温度50℃,搅拌转速600 rpm,反应时间2.5 h,可制备出棒状纳米氢氧化铝佐剂。(2)氢氧化铝产物的鉴定利用XRD、EDS、SEM、AFM及DLS对制备产物进行鉴定。结果表明,制备产物为一种表面带正电荷呈棒状的(直径200±80 nm,长度1.1±0.6μm)AlOOH颗粒,且形状规则、尺寸均匀。颗粒表面电荷为39±0.5 mV。(3)氢氧化铝佐剂辅佐的铜绿假单胞菌PAO1灭活疫苗的免疫学效应本研究以灭活PAO1为抗原来免疫小鼠。检测细胞和体液免疫应答能力、脾细胞增殖能力、APCs(巨噬细胞)对抗原的吞噬提呈能力、注射部位局部炎症大小及免疫保护率。结果显示,棒状纳米氢氧化铝辅佐的PAO1灭活疫苗不仅在首次免疫后第一周即可产生较高的抗体滴度,而且一直到第56天仍保持较高的抗体滴度;能诱导机体产生系统的细胞和体液免疫应答,并以细胞免疫应答为主;另外,能显著提升巨噬细胞对PAO1抗原的提呈能力,减轻注射部位的局部病理变化,提高免疫小鼠的保护率。综上所述,棒状纳米氢氧化铝佐剂辅佐的铜绿假单胞菌灭活疫苗免疫小鼠后,能诱导机体早应答、高应答、低炎症、高保护率。为解决快速紧急预防接种需求提供重要的实验依据及技术支撑。