骨髓间充质干细胞在小肠黏膜损伤小鼠体内的定植与分化

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小肠是人体重要的消化吸收器官,多种疾病可致小肠组织结构损伤并使其功能严重障碍,但小肠黏膜损伤修复的机制不明,因而在治疗上未能取得满意的效果。研究发现,小肠隐窝处存在着小肠上皮干细胞,它可以分化为吸收细胞、杯状细胞、肠内分泌细胞、潘氏细胞等小肠上皮细胞,在上皮细胞正常的哀老死亡和病理损伤后,干细胞增殖、分化,在上皮修复过程中发挥主导作用。而小肠上皮干细胞的增殖、分化行为受细胞基因及干细胞所处的微环境双重因素影响,生长因子、细胞因子和细胞基质分子形成的微环境提供了干细胞增殖与分化的必要的物质基础。黏膜固有层为小肠上皮提供支持网络,调节上皮细胞的功能。这层结构包含多种类型的细胞,如纤维母细胞、纤维细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞等,其中有一种属于肠黏膜特有的肌纤维母细胞--肠上皮下肌纤维母细胞(intestinal subepi thel ial myofibroblasts,ISEMFs)。ISEMFs形成一个网络状鞘样结构与隐窝共同延伸,并且促进隐窝周围血管新牛和生长。它们可能与肠上皮细胞一样,沿着隐窝到绒毛的方向向上增殖、迁移、分化,最后凋亡。许多研究认为它能分泌多种细胞因子和生长因子,在上皮一间质的相互作用中起关键作用。ISEMFs尚未见特异性标记物的报道,但由于兼有纤维母细胞和平滑肌细胞的超微结构,故α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimeiltin)表达阳性,结蛋白(desmin)表达阴性,可利用这些特征对ISEMFs进行鉴定。 新近的研究发现,小肠黏膜损伤后,除了小肠本身具有强大的自我更新及损伤修复能力外,一些肠外来源的细胞如骨髓的细胞等也参与了其中的调节。国外一些研究报道,将骨髓细胞移植入器官损伤的动物体内,可见损伤的器官内有外源的细胞定植,参与损伤的修复。Komori等在实验性炎症性肠病的大肠黏膜损伤部位见到外源的骨髓细胞定植。但骨髓里具体主要是哪种细胞定植及定植后的分化方向目前尚不清楚。 本实验分为两部分,第一部分:采用全骨髓培养法体外培养扩增雄性小鼠的MSCs,为体内移植做准备;第二部分:首先通过6Mev电子线制作雌性小鼠小肠放射性损伤,再把培养的雄性小鼠MSCs经尾静脉移植入雌性小鼠体内,通过Y染色体荧光原位杂交检测Y染色体上的雄性决定基因sry以检测外源MSCs的定植,同时免疫组化检测荧光阳性细胞α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(vimentin)、结蛋白(desmin)的表达情况,对MSCs在体内的分化进行研究。
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