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抗体在现代医学中起着重要的作用,被广泛地运用于实验室研究、疾病的诊断与治疗。噬菌体抗体库技术为人单抗的制备开创了一个全新的技术领域(Winter et al,1994),它使用聚合酶链延伸反应(PCR)方法,把免疫球蛋白全套可变区基因扩增出来,重组到原核表达载体中,并通过与噬菌体外壳蛋白形成融合蛋白,使抗体片段表达于噬菌体表面,可用类似亲和层析的方法,筛选特异性的可变区基因(Kang et al,1991;Marks et al,1991)。这样就可以不经过杂交瘤、甚至不经过免疫就可获得特异地结合不同抗原的抗体片段。本研究采用噬菌体抗体库这一新兴的生物学技术,采用未经免疫过的小鼠,取其脾细胞提取mRNA,经逆转录PCR扩增出抗体重链和轻链可变区基因,大小分别为 360bp和320bp左右,纯化回收的VH与VL在接近等摩尔浓度下,先采用含有Linker片段的引物将Linker片段连接到VL基因片段上去,然后与VH片段组装成单链抗体基因(ScFv),再用带有限制性内切酶位点的引物( 5’端SfiI,3’端NotI)扩增ScFv基因片段,获得大小约750bp的目的片段,纯化后分别用 SfiI和 NotI消化,与 SfiI/NotI双酶切的载体 pCANTAB-5E连接,化学法转化大肠杆菌TGI感受态细胞。转化菌经辅助噬菌体 M13K07挽救后,得到天然鼠源噬菌体抗体库(Barbas et al,1993)。提取质粒经PCR初步鉴定,证明有外源片段插入且其大小与目的片段一致。在成功构建天然鼠源单链抗体库的基础上,我们以猪IgG为靶抗原对噬菌体抗体库进行了三轮“吸附-扩增-洗脱”的富集过程,从而得到了猪IgG的次级噬菌体抗体库。用富集后的库液铺板并挑取单菌落制备噬菌体抗体,进行ELISA检测,得到了预期的效果。本研究为分子生物学高新技术研究内容的一个探索与尝试。本课题的完成,一方面为基因工程抗体的研究、抗体制备及新型生物制品的研究开辟了一条新的途径,具有重要的理论意义和实际应用价值;另一方面,为以后筛选制备各种基因工程抗体提供了一个新的方法和技术平台。