论文部分内容阅读
疏水电荷诱导色谱(hydrophobic charge induction chromatography,HCIC)是最近发展起来的一种新型色谱。在疏水电荷诱导色谱中，蛋白质在介质表面的吸附是通过接近生理条件下的疏水作用实现的；当流动相的pH降低时，配基与目标蛋白带同种电荷，吸附于色谱介质上的蛋白质通过静电排斥作用而解吸。HCIC无须对料液进行预处理且洗脱条件温和，因此降低了生物分离的成本。本文利用实验室开发的新型HCIC介质HA-Sepharose研究了蛋白质的吸附行为，考察了离子强度和pH对该介质的吸附性能的影响，具体如下：
1、以Sepharose CL-6B为初始介质制备新型疏水电荷诱导色谱介质时，加入亲水有机助溶剂二甲基亚砜可以有效提高介质的环氧基活化密度。当NaOH的浓度为0.8 mol/l、反应温度50℃、反应时间为3 h时，环氧基活化密度可以达到150μmol/ml gel以上。
2、配基的含量对配基的偶联密度至关重要，当配基的加入量相对不足时，偶联密度显著下降。适度延长偶联时间、提高反应温度或者提高反应体系的pH也可以提高介质的偶联密度。当配基过量5倍、反应温度为60℃、反应时间为12 h时，配基的偶联密度可以稳定在110μmol/ml gel左右的高水平上。
3、分别以溶菌酶、牛血清白蛋白和免疫球蛋白G为模型蛋白，考察了离子强度和pH对介质的吸附性能的影响。实验结果显示，当溶液中离子强度不高于1.5 mol/l时，三种蛋白的吸附容量随离子强度的变化仅有较小改变，HA-Sepharose介质对蛋白的吸附表现出HCIC色谱典型的非盐依赖性特征；而当缓冲液pH由7.0降低到4.6时，蛋白均从介质上解吸。这证明HA-Sepharose具有纯化各种蛋白的潜力。