【摘 要】
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果蝇细胞系的建立:以嗜凤梨果蝇胚胎为材料,采用常规方法获取发育4~8h的果蝇胚胎细胞,以改良M(BF)培养液体外培养,经40d左右的原代培养后行传代培养,以后每隔7d传代一次,传至
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果蝇细胞系的建立:以嗜凤梨果蝇胚胎为材料,采用常规方法获取发育4~8h的果蝇胚胎细胞,以改良M<,3>(BF)培养液体外培养,经40d左右的原代培养后行传代培养,以后每隔7d传代一次,传至10代时按照细胞系建立标准检测细胞系的一系列生物学特性.结果显示:细胞维持体外生长将近1年,传至60代.细胞在接种的0~96h内呈指数生长,临界增殖浓度为1.0×10<6>个(细胞)/毫升.部分细胞染色体呈现异倍化.经液氮冻存的细胞复苏后活性达90％以上.该细胞系是一株成功的细胞系,命名为HY-ANA.黑条体基因表达载体的建立:根据Hovemann在NCBI上公布的黑檀体突变基因(e)序列通过Oligo引物设计软件设计了两段引物:I<,1>和I<,2>,它们均带有附加的酶切位点XhoI和HindⅢ,并且两端均加有两个保护碱基.然后用Catrimox-14RNA isolation Kit Ver.2.11(Takara)RNA抽提试剂盒抽提RNA,再使用3-Race试剂盒(Takara)从黑条体果蝇中RT-PCR出黑条体突变基因的cDNA序列,然后将PCR产物连入T-Vector中,利用通过引物端加入的酶切位点,用限制性内切酶将目的基因片段切下,纯化回收片段后与准备好的pGEX-KG表达载体相连,构建为重组表达载体质粒pGEX-KG/Bsr.
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