【摘 要】
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当病原微生物侵入机体时,可被机体内的模式识别受体识别,激活相关信号传导通路,启动天然免疫反应和适应性免疫反应,发挥抗病毒的作用。在天然免疫中,有一种细胞因子即I型干扰
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当病原微生物侵入机体时,可被机体内的模式识别受体识别,激活相关信号传导通路,启动天然免疫反应和适应性免疫反应,发挥抗病毒的作用。在天然免疫中,有一种细胞因子即I型干扰素IFN-α/α发挥着关键作用,它们可以干扰病毒的基因的复制,从而抵御病毒的侵染。而干扰素调节因子家族是Ⅰ型干扰素产生的信号通路中最重要的转录调控因子家族。因此,其参与机体天然免疫的作用机制也日益为人们所关注。直至目前的研究发现表明,干扰素调节因子家族(IRFs)共有9个成员,它们的N端DBD结构域高度保守,可结合DNA序列一致或相似的元件。这些元件的共同特征是都含有保守的GAAA重复序列。IRFs的C端则表现出高度可变性,并因此赋予了它们不同的生物学功能。其中干扰素调节因子7(IRF7)是诱导Ⅰ型干扰素大量产生的最重要的转录调控因子,它与干扰素调节因子3(IRF3)协同发挥调控作用,诱导干扰素基因的启动表达。本课题拟从IRF7的结构生物学角度阐述其诱导调控干扰素产生的分子机制,为阐释IRF7其他的生物学功能提供最直接的证据。本实验拟用X射线晶体学测定IRF7的三维结构,涉及从基因到结构的一系列步骤:目标序列的选取,利用大肠杆菌原核表达系统进行大量表达,多种色谱技术进行纯化,获得高纯度蛋白进行后续的晶体生长实验,最后优化获得高分辨率的晶体,衍射数据的收集和处理、结构模型的搭建等。本文还采用了制备IRF7硒代甲硫氨酸蛋白衍生物,利用多波长反常散射(MAD)的方法来帮助获取相位和晶体结构的解析。
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