【摘 要】
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番木瓜是番木瓜科(Caricaceae)番木瓜属(Carica L．)植物，是热带、亚热带重要果树之一。鉴于番木瓜果实耐贮性差，成熟后在短时间内便迅速软化，甚至腐烂，因此提高番木瓜果实耐贮性一
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番木瓜是番木瓜科(Caricaceae)番木瓜属(Carica L．)植物，是热带、亚热带重要果树之一。鉴于番木瓜果实耐贮性差，成熟后在短时间内便迅速软化，甚至腐烂，因此提高番木瓜果实耐贮性一直是学者们的研究热点。迄今为止，在这一方面的研究以ACC氧化酶(ACO)、ACC合成酶(ACS)为主要对象，但对于与果实细胞壁降解密切相关的一些酶还未作深入的研究。本文以番木瓜果肉为材料，通过同源克隆分离出具有抗软化等功能的果胶裂解酶(PL)基因，以构建植物表达载体，为培育耐贮番木瓜新品种奠定基础。主要结果和结论如下： 1．建立了番木瓜总RNA提取和纯化的方法 改良的TRIzol法采取在提取裂解液中加入10％的无水乙醇、用氯仿抽提2次、改用LiCl来沉淀RNA，经过多次实验并与其他三种方法对比证明，该方法能够有效地去除果肉中的有机酸、酚类物质、蛋白质和多糖等杂质，获得纯净、完整的RNA样品，可以直接用于后续的RT-PCR和RACE反应。 2．采用RT-PCR克隆了番木瓜果肉PL基因cDNA片段 以番木瓜cDNA为模板，设计特异引物，经PCR扩增得到596bp的序列，所得核苷酸序列通过Blast分析，发现与草莓、拟南芥、芒果、葡萄等果胶裂解酶基因的相似性都较高，均在79％-82％之间。该核苷酸序列编码长177Aa的蛋白质。 3．采用染色体步移技术克隆了番木瓜PL DNA片段 以番木瓜DNA为模板，采用染色体步移技术，得到了1138bp的PL基因的核苷酸序列。经Blast分析，发现与芒果、草莓等的同源性较高，在78％以上。所得到的核苷酸序列的ORF包含721个核苷酸，将其翻译成蛋白质，得到全长为240Aa的氨基酸序列。将氨基酸序列的分析结果绘成进化树，从进化树可以看出，番木瓜果肉的PL与芒果、草莓的PL聚成一类，而与芭蕉、葡萄、辣椒的PL则属于不同基因家族。
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