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目的:鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma,NPC)是我国南方和东南亚地区最为常见的恶性肿瘤之一。由于其发病部位较隐蔽及早期症状不明显,就诊时多为晚期,导致不少患者延误了治疗。因此,筛选出鼻咽癌早期诊断的相关血清学标志物尤为迫切。本研究应用蛋白质芯片及表面加强激光解吸/电离飞行时间质谱(surface-enhanced laser desorption/inionation-time of flight-mass spectra,SELDI-TOF-MS)技术,筛选鼻咽癌患者血清蛋白质,并对差异蛋白进行鉴定。另外,对所鉴定的淀粉样蛋白A(Serum amyloid protein A,SAA)与鼻咽癌的关系进行了初步研究。方法:收集了113例鼻咽癌患者、67例鼻咽部良性疾病患者和82例正常对照血清标本,-80℃保存备用。采用弱阳离子交换蛋白质芯片(CM10蛋白芯片)进行蛋白质检测,然后用Biomarker Wizard?3.2软件对结果进行分析(定义信噪比为5,激光能量为220,检测器敏感度为9,最佳检测分子量范围为3000-50000D)。同时,应用Tricine-SDS-PAGE胶分离和质谱鉴定,对所检测到的差异蛋白峰进行蛋白质鉴定,并采用Western-blotting进一步验证该蛋白质在鼻咽癌患者、鼻咽部良性疾病患者和正常对照血清中的表达。应用RT-PCR和Western-blotting检测SAA蛋白质在鼻咽癌细胞系CNE2、HNE1以及正常鼻咽上皮细胞(原代)中的表达。网上查阅SAA基因的全长cDNA序列,依据该序列设计3个特异干扰片段,插入pSIREN-Shuttle(Clontech公司)RNA干扰表达??体,构建针对SAA基因的干扰表达载体,以空载体为阴性对照,转染CNE2细胞,运用RT-PCR和Western-blotting方法,分析SAA基因表达,建立SAA基因表达明显降低的CNE2细胞系。采用MTT法、流式细胞术及平板集落形成实验,检测SAA基因表达降低对CNE2细胞生长、增殖及集落形成的影响。结果:(1)在102例鼻咽癌患者血清中出现一个峰值(阳性率为90.27%),明显高于鼻咽部良性疾病患者和正常对照的蛋白峰(t=6.34;P<0.05),大小约为11.72km/z。经Tricine-SDS-PAGE胶分离和质谱鉴定分析,11.72k m/z蛋白峰为血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid protein A,SAA)。(2)RT-PCR和Western-blotting检测结果显示,SAA蛋白质在鼻咽癌患者血清中呈较高水平表达,而在鼻咽部良性患者和正常对照的血清中低表达或不表达。SAA蛋白质在两株鼻咽癌细胞CNE2及HNE1中的表达均较高,而在正常鼻咽上皮细胞(原代)中则低表达或不表达。(3)成功构建的pSS-SAA siRNA表达载体,能有效干扰SAA基因在CNE2细胞的表达,SAA基因在CNE2细胞中的表达降低,其生长增殖速度减慢及细胞集落形成能力均降低(t=5.26 ;P<0.05)。结论:(1)成功筛选和鉴定出鼻咽癌血清候选标志物SAA。(2)成功建立了能有效干扰SAA基因表达的CNE2细胞系。(3)鼻咽癌患者血清中存在SAA蛋白质的高表达,SAA基因的高表达可能与鼻咽癌的发生发展密切相关。