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选题依据:中药复方中所含有的化学成分是其发挥药效的物质基础,对中药复方的化学成分展开研究,明确复方中所含的成分,对于阐明复方中发挥药效的成分、建立评价复方中药材的指标成分,使中药更加标准化、规范化具有重要的意义。防己黄芪汤(FHT)出自于张仲景的《金匮要略》,近年来关于FHT在临床上的应用主要集中于慢性心衰、心源性水肿、类风湿关节炎、肾小球肾炎、肾病综合征等疾病,目前该方在药效方面的研究相对较清楚,但有关该方的化学成分研究及其体内代谢研究的报道较少。因此,本课题拟基于HPLC和UHPLC-Q-Exactive技术建立FHT的体外和体内化学成分谱,为研究FHT的药效成分提供一定的研究基础。目的:建立FHT的体外和体内化学成分谱,明确复方中的化学成分及其进入体内的成分。方法:(1)通过HPLC-UV-ELSD建立FHT的指纹图谱,运用相似度评价软件对10批FHT指纹图谱进行相似度计算,并对共有峰进行药材归属及成分指认。(2)通过对照品比对及相关文献定性识别防己黄芪汤UHPLC-Q-Exactive图谱中的色谱峰,全面鉴定其化学成分。(3)通过外翻肠囊实验,考察了小肠吸收FHT的最佳浓度,并对小肠不同部位对药物吸收成分的差异性进行研究。(4)利用已建立的UHPLC-Q-Exactive表征FHT体外化学成分方法,对大鼠给予FHT后的血液、尿液和粪便中的成分进行分析,明确复方进入体内的化学成分及其代谢物。结果:(1)建立了FHT的HPLC-UV-ELSD指纹图谱,在FHT HPLC-UV指纹图谱中标定20个共有峰,并对标定的共有峰进行药材归属及成分指认,其中共有峰主要来自防己、黄芪和甘草三个药材,通过对照品指认出复方中9个成分,该方法表征FHT中部分化学成分信息,操作方便、简单,可为FHT质量控制提供了一定的科学依据。(2)利用UHPLC-Q-Exactive技术建立了FHT中的化学成分的分析方法,借助质谱的精确质量数、保留时间和碎片信息,结合对照品的保留时间,共鉴定了78个成分,主要包括黄酮、皂苷、生物碱和内酯类化合物。该研究基本阐明了FHT中化学成分类别,为复方体内化学成分的研究奠定一定的基础。(3)通过外翻肠囊实验,得到小肠吸收的最佳浓度为0.147 g/mL,并比较小肠不同部位对药物吸收成分的差异。发现小肠中空肠部分吸收成分较多,其吸收成分主要为生物碱、黄酮、皂苷和内酯类成分。(4)通过分析灌胃大鼠防己黄芪汤水提液后大鼠血清、尿液、粪便中的化学成分,结果显示,血清中共鉴定了10个原型成分,28个代谢物,尿液中21个原型成分,粪便中12个原型成分。结果表明,灌胃防己黄芪汤水提液后,大鼠血液、尿液和粪便中的主要化学成分为生物碱类、黄酮类和皂苷类化合物。分析其代谢产物主要是以氧化、还原、甲基化、去甲基化、硫酸化、葡萄糖醛酸化等代谢过程为主。其入血成分及其代谢产物可能是FHT发挥药效的成分。该研究为阐明FHT的可能发挥药效的成分提供了依据。结论:建立了FHT的HPLC-UV-ELSD指纹图谱;对FHT中主要化学成分进行初步的推测和鉴定;鉴定出小肠的吸收成分;并对血清、尿液及粪便中化学成分进行分析。