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VP3蛋白（亦称Apoptin）是来源于鸡贫血病毒（chicken anemia virus，CAV）的一个小分子蛋白质。研究表明，Apoptin 能选择性地诱导人转化细胞和肿瘤细胞发生凋亡，而对正常二倍体细胞无作用，是一种理想的抗肿瘤药物。本实验室前期的研究成功构建了PTD4-VP3 融合蛋白的原核表达载体，通过大肠杆菌原核表达系统诱导表达后获得了PTD4-VP3 融合蛋白。但实验发现，该蛋白大量以无活性的包涵体形式存在。
而可溶性表达量却很低。本实验尝试将PTD4-VP3 融合蛋白包涵体复性，然后用MTT法和流式细胞术检测复性后蛋白的生物学活性。为PTD4-VP3的大量制备提供新的思路。
将含重组质粒 pET-28a-PTD4-VP3的表达菌株E.coli BL21 (DE3)PlysS 接种于含有50μg/ml 卡那霉素的LB 培养基中诱导表达，将获得的融合蛋白包涵体溶解于8M 尿素中过夜。用亲和层析的方法，将溶解的包涵体过镍柱纯化。再将纯化后的包涵体置于透析袋中，在梯度浓度的尿素复性液中缓慢复性。用SDS-PAGE和BCA 蛋白定量检测包涵体的纯度和浓度。MTT 法检测复性后包涵体抑制肿瘤细胞增殖的效果。流式细胞术观察复性后包涵体对肿瘤细胞的凋亡率。
SDS-PAGE 显示，在上样量相等的条件下，包涵体的条带深度明显高于可溶性表达，蛋白BCA 定量后，发现从1L E.coli 菌液中可得到高达8.5±0.7mg的PTD4-VP3 包涵体。而仅仅只能得到0.7±0.3mg的PTD4-VP3 可溶性表达。MTT 法显示：在25μg/ml,50μg/ml,75μg/ml,100μg/ml 四个蛋白浓度点，PTD4-VP3 融合蛋白复性后包涵体对人源宫颈癌Hela细胞增殖的抑制率分别为40±2.1％、70±2.2％、71±2.4％和91±2.9％。PTD4-VP3 可溶性表达的抑制率分别为20±1.7％、32±1.9％、50±2.5％和58±2.8％。流式结果显示：在5μg/ml,10μg/ml,20μg/ml,25μg/ml 四个蛋白浓度点，复性后包涵体诱导Hela细胞的凋亡率分别为40.5±2,8％、63.1±3.6％、62.3±4.5％、61.4±3.8％。可溶性表达组的凋亡率分别为41.8±2.2％、60.3±3.2％、64.6±3.8％、59.8±4.5％。由此可看出，因此本实验成功复性了PTD4-VP3 蛋白,蛋白的活性完全得到恢复。这种从包涵体中复性PTD4-VP3 融合蛋白的方法为PTD4-VP3的大量制备提供了的新的思路。