猪膀胱细胞外基质的制备方法及其生物活性的研究

来源 :桂林医学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:kevinwang2009
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目的: 细胞外基质(extracellular matrix,ECM)的生物相容性主要决定于其脱细胞效果。本实验对两种猪膀胱ECM制备方法的脱细胞效果进行比较,并检测脱细胞后ECM纤维类型;通过使用猪膀胱ECM消化降解产物在体外培养大鼠脾细胞,使用MTT法评价其对脾细胞的相对增殖率;通过建立大鼠背部皮肤缺损模型,在缺损区滴加ECM消化降解产物,观察周边皮肤修补缺损的情况及毛囊再生情况。  方法:⑴分别采用酸性溶液法和细胞表面清洁剂法对新鲜猪膀胱组织进行脱细胞处理。HE和Masson染色后在显微镜下观察脱细胞效果。纤维四重染色法观察ECM纤维类型。⑵使用MTT方法检测猪膀胱ECM消化降解产物对脾细胞的相对增殖率,观察时长为8天。⑶建立大鼠背部皮肤缺损实验模型,在缺损区域每日滴加细胞表面清洁剂处理组ECM消化降解产物100μl,连续滴加1周,4周后处死,取缺损部位皮肤做HE染色观察周边皮肤修补缺损的情况及毛囊再生情况。  结果:①细胞表面清洁剂处理组制备的猪膀胱ECM脱细胞更为彻底。酸性溶液处理组制备的猪膀胱ECM仍有细胞和肌纤维残留。纤维四重染色观察两种方法处理后的猪膀胱ECM主要成分均为胶原纤维。②MTT法检测脾细胞相对增殖率显示,两个处理组无明显差别。③HE染色显示,滴加细胞表面清洁剂处理组猪膀胱ECM消化降解产物的大鼠毛囊基底细胞数量比对照组有明显增多,双尾t检验结果为t=4.821,P=0.001<0.05,可以认为两组毛囊基底细胞计数结果的差别有统计学意义。  结论:⑴脱细胞效果方面细胞表面清洁剂法优于酸性溶液法。⑵两处理组制备的猪膀胱ECM消化降解产物在促进细胞增殖方面没有明显差别。⑶细胞表面清洁剂组制备的猪膀胱ECM降解产物对大鼠毛囊基底细胞数量有明显诱导增多的趋势,表明该降解产物可能会对皮肤再生有一定的效果,具体机制需要后续研究进一步探讨。
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