论文部分内容阅读
肠道病毒71型(EV71)是手足口病的主要病原体。虽然大多数被感染的婴幼儿只表现为发热和手、足、口腔等部位的疱疹，但部分患儿表现为严重的神经系统症状乃至死亡。清道夫受体B亚家族成员Ⅱ（SCARB2）是EV71的功能性受体，它可以介导病毒的吸附、穿入和脱衣壳。另外，包括P-选择素糖蛋白配体-1(PSGL-1)在内的多个分子可以与EV71结合并促进其感染。 浆样树突状细胞(pDC)是主要的Ⅰ型干扰素产生细胞，在抗病毒免疫中发挥着重要作用。本实验室前期研究表明，pDC表达SCARB2的水平显著高于其它免疫细胞。在本研究中，我们发现pDC表达PSGL-1的水平也高于其它免疫细胞。与以往报道相一致，我们证明EV71不能在人外周血单个核细胞(PBMC)中复制。然而，EV71却能够在纯化的pDC中复制并导致感染细胞死亡。PSGL-1抗体或融合蛋白都可以阻断病毒的增殖，说明EV71感染pDC是PSGL-1依赖的。同时，EV71感染pDC也依赖于SCARB2，在pDC细胞系中敲低SCARB2能够抑制EV71的复制。但是，SCARB2抗体却不能抑制EV71感染pDC，提示在pDC感染中，SCARB2的主要作用是介导病毒在内吞体的脱衣壳过程，而PSGL-1主要介导病毒的吸附和内吞。进一步研究表明，EV71能够刺激pDC产生IFN-α。然而，pDC的激活并不依赖于EV71的复制，紫外线灭活的病毒粒子也能刺激IFN-α的产生。PSGL-1抗体或融合蛋白都可以阻断pDC活化和IFN-α产生，说明EV71激活pDC依赖于PSGL-1。 有报道显示，只有部分EV71分离株能够结合PSGL-1，这一现象是病毒VP1蛋白的第145位氨基酸决定的。如果VP1-145为甘氨酸(G)、谷氨酰胺(Q)或者丙氨酸(A)，则该毒株能结合PSGL-1;如果VP1-145为谷氨酸(E)，病毒不结合PSGL-1。我们将上述研究中使用的EV71毒株从原来的VP1-145-A突变为G或者E，发现突变成G对病毒感染或刺激pDC的能力没有影响，而VP1-145-E病毒失去了感染和激活pDC的能力。因此，我们进一步从病毒的角度证明了EV71感染和激活pDC都是PSGL-1依赖的。 分子流行病学显示，EV71 VP1蛋白145位点的多态性与疾病的严重程度密切相关。VP1-145-E毒株通常分离于轻症状患儿，而VP1-145-AGQ毒株通常分离自重症的患儿。Hiroyuki Shimizu等人在EV71感染食蟹猴的模型中发现，VP1-145-E能够在动物体内复制。出乎意料的是，VP1-145-G的复制水平极低，而且复制的病毒大都突变成了VP1-145-E。对于这一现象，作者没能给出合理的解释。结合上述现象和本研究的结果，我们对VP1-145多态性与疾病严重程度相关的现象，提出如下模型:VP1-145-E是弱毒株，只能导致轻症感染;VP1-145-AGQ是强毒株，同时它们又可以刺激pDC产生干扰素，因此对于成年人和大多数婴幼儿而言，该毒株在干扰素的作用下，或者不能大量复制，或者突变成VP1-145-E而表现为轻症感染。而对于少数pDC反应能力低下的儿童，VP1-145-AGQ感染不能诱导干扰素，从而进一步复制并表现为重症感染。 本研究的结果在如下两个方面对防制EV71感染有一定的借鉴意义:1）由于VP1-145-AGQ提示感染者的免疫力低下并有可能表现为重症感染，分子病毒学诊断时有必要分析VP1-145的序列，为制定临床治疗方案提供参考。2）在选择EV71疫苗候选株时，应该考虑VP1-145多态性对病毒颗粒免疫原性的影响。