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背景与目的:结直肠癌(Colorectal Cancer,CRC)是一种较为常见的消化道恶性肿瘤,近年来其发病率有明显上升趋势。结直肠癌的发病是一个牵涉到多基因、多步骤的复杂过程,因此其具体的发病机制仍不明确。膜联蛋白(Annexins,ANX)家族是一种钙依赖性磷脂结合蛋白的超家族。该家族不仅参与胞吞、胞吐、细胞凋亡以及细胞骨架构成等生理活动,而且在多种肿瘤的增殖、侵袭、转移以及化疗耐药中也发挥了重要作用。Annexin A4是该家族里的一员,近年来的研究显示,膜联蛋白A4(Annexin A4,ANXAⅣ,ANXA4)的表达失调、定位改变均与肿瘤密切相关,并可能与肿瘤的侵袭迁移有关,但其涉及的具体分子机制尚未清楚。本课题拟通过si RNA干扰技术沉默结直肠癌细胞中Annexin A4的表达,探讨Annexin A4对结直肠癌细胞上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子的表达以及对肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响,进一步丰富Annexin A4在结直肠癌侵袭转移过程中的分子机制。方法:通过q RT-PCR法和Westem blot免疫印迹法检测三种结直肠癌细胞系(SW480、SW620、HT-29)中Annexin A4以及EMT相关的关键分子的表达情况,分析Annexin A4表达水平与结直肠癌EMT的关系,并筛选出适合本实验研究的细胞系HT-29;采用si RNA技术干扰结直肠癌HT29细胞中Annexin A4的表达后再通过q RT-PCR法和Westem blot免疫印迹法检测Annexin A4以及部分EMT相关重要分子(如:E-caderin、N-caderin等)表达水平的变化;采用si RNA技术干扰结直肠癌HT29细胞中Annexin A4的表达后,再通过MTT实验和平板集落形成实验检测结直肠癌HT29细胞的增殖情况的变化,Transwell体外侵袭实验检测结直肠癌HT29细胞体外侵袭能力的改变,划痕试验检测结直肠癌HT29细胞体外迁移能力的改变。结果:1.q RT-PCR法检测结果显示Annexin A4 m RNA在正常结肠上皮细胞株NCM460中表达很低,而在结直肠癌SW620、SW480、HT29细胞株中Annexin A4 m RNA表达水平明显增高,尤其以结直肠癌HT29细胞最为明显;2.Western Blot法检测结果显示结直肠癌HT29细胞株Annexin A4的表达水平相对于结直肠癌SW620、SW480细胞株表达最高,这与q RT-PCR法检测的结果一致;3.q RT-PCR法和Western Blot法检测结果显示结直肠癌HT29细胞系上皮表型标志分子E-caderin分子表达明显低于其他结直肠癌SW620、SW480细胞株,而间质表型特异性分子N-caderin分子表达明显高于结直肠癌SW620、SW480细胞系;4.si RNA技术干扰结直肠癌HT29细胞的Annexin A4表达后,q RT-PCR法检测结果显示si A4组结直肠癌HT29细胞内N-candherin、MMP9、MMP2、ZEB1、Snail、Slug和Vimentin表达水平低于si NC组,差异具有统计学意义(P<0.05),而E-candherin的表达水平明显升高,差异具有统计学意义(P<0.001);5.si RNA技术干扰结直肠癌HT29细胞的Annexin A4表达后,Western Blot法检测结果显示si A4组结直肠癌HT29细胞的上皮细胞标志物E-cadherin的蛋白表达水平明显高于si NC组,而间充质细胞标志物N-caderin的蛋白水平明显降低;6.si RNA技术干扰结直肠癌HT29细胞的Annexin A4表达后,MTT实验检测结果显示si A4组结直肠癌HT29细胞增殖速度较si NC组明显降低((P<0.01),细胞克隆形成实验检测结果显示si A4组细胞克隆形成数较si NC组明显减少(P<0.001)。7.si RNA技术干扰结直肠癌HT29细胞的Annexin A4表达后,Transwell基质胶侵袭实验检测结果显示si A4组结直肠癌HT29细胞侵袭小室的细胞数目较si NC组明显减少((P<0.01),划痕愈合实验检测结果显示si A4组细胞的迁移能力较si NC组明显减弱;结论:1.结直肠癌中Annexin A4的表达水平与EMT关键分子密切相关,可作为结直肠癌侵袭转移的潜在分子标志物;2.si RNA干扰Annexin A4的表达下调能有效抑制结直肠癌细胞系HT29的体外生长、侵袭和迁移能力。