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目的：消化性溃疡的发生是由于侵袭因子(幽门螺旋杆菌感染、胃酸和胃蛋白酶作用、非甾体类抗炎药的应用、遗传因素、胃和十二指肠动力异常、应激和精神因素等)与防御因素(胃粘液-重碳酸盐屏障、粘膜屏障、粘膜血流、细胞更新、前列腺素和表皮生长因子等)之间平衡失调所致。消化性溃疡是一个世界性范围的胃肠道疾病,约占全球人口10%的人都曾患过消化性溃疡,其中1%的溃疡可以转化为胃癌,本病被世界卫生组织列为癌前状态疾病,对人类健康危害极大。研发新一代安全、高效的抗消化性溃疡药物,具有迫切的需求和重要的现实意义。中药药代动力学研究能够阐明和揭示中草药作用机制及科学内涵,通过对中草药体内动态变化过程的研究,研究机体对药物的处置,可以阐明其作用机理以及对中药传统理论赋予现代科学的解释。岭南地产药材广藿香是中医临床上治疗消化系统疾病常用的中药,具有芳香化浊,和胃止呕的功效,用于湿阻中焦,脘痞呕吐等胃肠疾病,其治疗的适应症与现代医学上的消化性溃疡症状相似。课题组近期研究发现,广藿香主要成分广藿香酮不仅对白色念珠菌有杀灭作用,而且具有抗炎、抗脓毒血症的作用。本课题拟通过建立无水乙醇和吲哚美辛诱导的实验性胃溃疡的动物模型,考察广藿香酮对该模型的保护作用,并探索其可能的作用机理：通过利用LC-MS/MS和UPLC技术,建立大鼠血浆和组织中检测广藿香酮的方法,并测得每个时间点广藿香酮在大鼠体内的吸收分布,利用DAS 3.1.5软件计算其药动参数,分析广藿香酮在大鼠体内吸收及分布规律,阐明广藿香酮在大鼠体内的吸收转运特点。方法：1.广藿香酮对无水乙醇致实验性胃溃疡的保护作用研究研究采用无水乙醇诱导大鼠,建立急性胃溃疡模型,口服灌胃广藿香酮,通过软件计算溃疡指数和溃疡抑制率,采用HE染色观察胃组织形态学,探讨药物对无水乙醇致大鼠胃溃疡的保护作用。同时,通过测定血清中炎症介质(TNF-α、IL-6和IL-10),胃组织中的氧化及抗氧化因子(SOD、GSH、CAT和MDA),以及胃组织中PGE2和NP-SH量,阐述广藿香酮对无水乙醇诱导的大鼠胃溃疡可能的保护机制。2.广藿香酮对吲哚美辛致实验性胃溃疡的保护作用研究研究以非甾体类抗炎药吲哚美辛作为诱导物,建立大鼠急性胃溃疡模型,通过广藿香酮7天的预防治疗,测定溃疡指数、溃疡抑制率以及病理形态学研究,综合评价广藿香酮对吲哚美辛所致的大鼠急性胃溃疡模型的保护作用。另外,为进一步了解保护机理,测定抗氧化酶SOD、GSH和CAT的活性,氧化产物MDA的含量,以及PGE2的含量和COX-1和COX-2的表达量,同时采用免疫组化测定Hsp70、Bax及Bcl-2蛋白表达的变化趋势。3. LC-MS/MS测定广藿香酮在大鼠体内的药代动力学研究采用TSQ Quantum Access MAX高效液相色谱-质谱联用仪(美国Thermo Fisher Scientific公司),以大黄酚为内标物,选用甲醇直接沉淀蛋白的样品前处理方法。色谱柱采用的是YMC-UltraHT Pro C18柱(50×2.0 mm i.d.,2μm),柱温为30℃,流动相为甲醇-水(75：25)等度洗脱5min,流速0.4mL/min,进样量为5μL。离子源选用电喷雾离子源(ESI),检测方式为负离子模式检测,扫描方式为选择反应检测扫描(SRM),离子对分别选用离子质荷比为m/z 223.0→139.0(广藿香酮)和离子质荷比为m/z 253.1→224.9(内标物)。鞘气45 psi,辅助气10 psi,碰撞气15 psi,喷雾电压：2000 V；广藿香酮的碰撞能量：20 V,广藿香酮的离子源喷雾电压：2500 V;广藿香酮的毛细管温度为350℃,大黄酚的碰撞能力：2500 V;大黄酚的离子源喷雾电压：31V,大黄酚的毛细管温度为350℃。4. UPLC测定广藿香酮在大鼠体内的组织分布研究将大鼠随机分成两组,一组为静脉注射给药组,一组为口服给药组,分别给予10mg/kg剂量的广藿香酮。静脉注射给药后,于15,60和360 mmin时间点处死大鼠,而口服给药组于30,90和360 min时间点测定各个组织中药物含量。UPLC法在Shimadzu LC-20A UFLC system高效液相色谱仪进行,采用ACQUITY UPLC BEH C18柱(2.1mm × 50mm ID,1.7 μm),以含有0.1%甲酸的乙腈-水法(55：45,V/V)作为流动相,检测波长为310nm,流速为0.4 mL/min,柱温：30℃,进样量为5μL。结果：1.广藿香酮对无水乙醇致实验性溃疡的保护作用研究不同剂量的广藿香酮能有效对抗无水乙醇所致大鼠胃粘膜损伤,降低溃疡面积和溃疡指数,改善病理形态；能够降低无水乙醇致实验性胃溃疡模型大鼠血清TNF-α和IL-6浓度,提高IL-10水平；提高胃组织SOD、CAT和GSH活性,降低MDA含量,同时提高NP-SH和PGE2含量。因此,广藿香酮对实验性胃溃疡保护作用可能与改善炎症反应,调节氧化平衡,提高PGE2水平有关。2.广藿香酮对吲哚美辛致实验性溃疡的保护作用研究广藿香酮(10,20和40mg/kg)能够对吲哚美辛所致大鼠实验性溃疡有保护作用,降低溃疡面积和溃疡指数,改善组织形态结构；能够有效提高大鼠胃组织SOD、CAT和GSH水平,降低MDA含量；上调吲哚美辛致实验性胃溃疡大鼠胃组织COX-1和COX-2的mRNA表达,提高PGE2含量；免疫组化结果表明广藿香酮还能够提高Bcl-2和Hsp70蛋白含量,减少Bax含量。综上,广藿香酮能够保护吲哚美辛致大鼠胃溃疡,机制可能是通过提高抗氧化酶SOD、GSH和CAT的活性,降低氧化产物MDA的水平,以及提高PGE2的含量及COX-1和COX-2的表达量,同时能够升高胃组织中HsP70、Bcl-2蛋白表达量,降低Bax的表达量实现的。3. LC-MS/MS测定广藿香酮在大鼠体内的药代动力学研究广藿香酮血浆浓度线性范围在0.05-160 μg/mL,线性关系良好(r=0.9996),其日间和日内精密度均小于10%,符合药动学分析要求。所建立并验证的方法顺利运用于临床前的药动学的研究,其中包括了静脉注射给药和口服灌胃给药两种形式(5,10和20 mg/kg)。最后口服广藿香酮的绝对生物利用度对于5,10和20 mg/kg3种剂量分别为70.39%,78.18%和83.99%。4. UPLC测定广藿香酮在大鼠体内的组织分布研究广藿香酮在各个组织中的线性范围为0.1-40μg/mL,线性关系良好,r>0.9984,最低检测限和最低定量限分别是0.1及0.05 μg/mL。其方法的准确度、稳定性和回收率等均符合组织分布的研究。结论：实验表明,广藿香酮能够对抗无水乙醇和吲哚美辛引起的实验性胃溃疡,降低溃疡面积和溃疡指数,改善组织形态结构,能够提高大鼠胃组织中PGE2含量,同时提高抗氧化酶SOD、GSH和CAT的活性,降低氧化产物MDA的水平。对于无水乙醇致大鼠实验性胃溃疡模型,广藿香酮还能改善炎症反应,降低血清TNF-α和IL-6浓度,提高IL-10水平,提高胃组织中NP-SH水平。而对于吲哚美辛致实验胃溃疡模型,广藿香酮能够提高组组织中COX-1和COX-2的表达量,同时能够升高胃组织中Hsp70、Bcl-2蛋白表达量,降低Bax的表达量。研究中建立的LC-MS/MS测定血浆中广藿香酮方法和UPLC测定大鼠各个组织中广藿香酮的方法专属性强,基质效应影响小,且具有良好线性关系、灵敏度、精确度和准确度,还具有良好的稳定性,能够用于广藿香酮在大鼠血浆药代动力学和组织分布的研究。