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研究目的：抗磷脂综合征(antiphospholipid syndrome, APS)主要临床症状包括血清中存在的高滴度抗磷脂抗体(antiphospholipid antibodies, aPLs)、反复发作的动静脉血栓形成、血小板减少、习惯性流产等。其中,血栓是APS病人致死的主要原因之一,而血清中高滴度的aPLs被认为在血栓形成中起到重要作用。抗β2GPI抗体(anti-β2GPI Ab)是与APS患者血栓形成关系最为密切的aPL,阴性磷脂结合蛋白β2糖蛋白I (β2-glycoprotein I, p2GPI)是抗β2GPI抗体的关键靶抗原。有大量文献表明,抗β2GPI抗体(anti-β2GPI Abs)可以通过TLR4/NF-KB通路引起内皮细胞黏附分子(ICAM-1、ICAM-1、E-selectin)及组织因子(tissue factor, TF)的高表达。但是,对抗β2GPI抗体在体内引起内皮细胞功能异常的机制仍旧缺乏足够的研究。基于这一背景,我们利用抗β2GPI抗体刺激C3H/HeN小鼠(TLR4表达正常)以及C3H/HeJ小鼠(TLR4表达缺陷),探讨TLR4及其下游信号分子p38MAPK和NF-κB p65是否参与抗β2GPI抗体介导的小鼠血管内皮细胞活化和黏附分子与组织因子的表达。研究方法：(1)分别用抗β2GPI抗体、LPS和生理盐水通过腹腔注射刺激C3H/HeN及C3H/HeJ两种小鼠。0 h、48 h各注射一次,72 h后取小鼠动脉进行免疫组织化学染色,检测小鼠动脉内皮细胞层中VCAM-1、ICAM-1、E-selectin蛋白表达情况,观察抗β2GPI抗体对小鼠内皮细胞的活化作用及TLR4在其中的作用。(2)利用Western blot及实时荧光定量PCR (Real-time quantitative PCR, RT-qPCR)检测抗β2GPI抗体、LPS及生理盐水组刺激后C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠动脉血管匀浆中的ICAM-1、VCAM-1、E-selectin蛋白及mRNA的表达水平。(3)抗p2GPI抗体刺激C3H/HeN及C3H/HeJ两种小鼠后,利用RT-qPCR和TF活性试剂盒检测主动脉血管匀浆中TF的mRNA表达和蛋白活性,以观察TLR4对动脉血管的TF表达的影响。(4)利用Western blot检测C3H/HeN和C3H/HeJ小鼠分别经anti-β2GPI、LPS、生理盐水刺激后,动脉血管匀浆中p38MAPK以及NF-κB p65的总蛋白及磷酸化水平,以观察anti-β2GPI对小鼠动脉TLR4/NF-KB通路的影响。研究结果(1)经抗β2GPI抗体刺激后,C3H/HeN小鼠的动脉内皮细胞层ICAM-1、 VCAM-1、E-selectin分子的阳性染色率较生理盐水组明显增高,与LPS组具有相同的刺激效应。而C3H/HeJ小鼠经anti-β2GPI刺激后,动脉内皮未见明显阳性表达,与相同刺激的C3H/HeN小鼠相较有显著差异。(2)经抗β2GPI抗体刺激后,C3H/HeN小鼠动脉血管匀浆中VCAM-1、 ICAM-1和E-selectin mRNA和蛋白表达升高,与生理盐水组或C3H/HeJ小鼠刺激组相比差异显著,且具有统计学意义(p<0.05)(3)抗β2GPI抗体刺激后,C3H/HeN小鼠动脉匀浆中TF的mRNA水平和蛋白活性高于C3H/HeJ小鼠,该差异具有统计学意义(p<0.05)(4)抗β2GPI抗体刺激后,C3H/HeN小鼠动脉血管匀浆中p38 MAPK和NF-κB p65的磷酸化水平升高,并且与生理盐水组或C3H/HeJ小鼠刺激组差异显著(p<0.05)。结论：(1)抗β2GPI抗体能够在体内引起小鼠血管内皮细胞的活化,从而高表达粘附分子与组织因子,这与之前的体外实验的报道是一致的。(2)TLR4基因的缺陷可显著但不完全地抑制抗β2GPI抗体对内皮细胞的活化,这一结果提示抗β2GPI抗体诱导的内皮细胞活化可能部分依赖于TLR4的作用：(3)抗β2GPI抗体刺激后引起的TLR4下游信号分子p38MAPK、 NF-κB p65高表达和磷酸化提示TLR4/NF-κB信号通路可能参与到抗β2GPI抗体诱导的小鼠血管内皮活化。