论文部分内容阅读
本文对从健康的养殖大菱鲆肠道及其养殖水体中筛选分离的益生菌进行了研究。通过一系列的体外抑菌、产酶实验及菌株安全性实验，对从大菱鲆肠道及生活环境中分离得到的3株益生菌在提高免疫力和生产性能等方面的作用进行了深入全面的研究，旨在为大菱鲆疾病防治提供新的途径。
采用稀释涂布分离细菌的方法从不同时期、不同样品中分离纯化得到98株细菌，以大菱鲆肠炎、腹水的致病菌鲨鱼弧菌(Vibrio archariae)和大菱鲆弧菌(Vibrioscophthalmi)为指示菌株，从中筛选出10株对大菱鲆肠道常见致病菌有较强拮抗作用的菌株，并对其产蛋白酶能力进行了测定。从中筛选得到3株拮抗作用强、产酶力较高的菌株。根据形态学观察，溶血性、生理生化指标及抗生素敏感性测定，以及16S rDNA分子生物学鉴定，结果显示TYTG-1和TGJ为枯草芽孢杆菌Bacillussubtilis，TGS为解淀粉芽孢杆菌Bacillus amylolyquefaciens。在对3株菌生长特性研究的基础上，证实了上述3株菌具有广泛的适温范围(4～42℃)，pH4.0～9.0，盐度0～100‰。根据使用复合益生菌菌株不得产生相互拮抗作用的原则，将筛选出的潜在益生菌进行等比配伍，结果显示配伍菌株相对单株菌并未显著提高对病菌的拮抗作用。
为了评价上述3株潜在益生菌对养殖大菱鲆的生理作用以及在大菱鲆体内的作用效果，本文研究了饲料中添加不同浓度潜在益生菌109和107CFU/g、连续投喂大菱鲆幼体，对大菱鲆成活率、免疫力、中肠组织结构和生长性能的影响。以血清中酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LSZ)、过氧化物酶(POD)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮合酶(NOS)活性以及蛋白含量为非特异性免疫相关指标，定期测定以研究酶活指标的变化规律，并测定了免疫保护率(RPS)。结果显示，在投喂3株潜在益生菌的期间里，除溶菌酶(LSZ)各实验组之间基本没有变化外，其余添加潜在益生菌组随着时间的延长，酶活性均有不同程度的提高。总体上各实验组ACP的活性均在第21d达到最大值，在第28d活性趋向较低的状态；POD活性随着时间的延长呈上升趋势；SOD是先上升后下降，继而上升；NOS总体变化不明显，但与对照组相比，TYTG-1各浓度组均在7d、14d和28d有显著差异(P＜0.05)，TGJ组在第14d、21d有显著差异，TGS-7在各个不同时间均与对照组有显著差异；血清中蛋白含量是在投喂两周时各组的最高，其中TYTG1-9、TGJ-9和TGJ-7在14d达到最大，和对照组有显著差异（P＜0.05）。投喂期间，大菱鲆的生长速度加快，发病率降低。肠道组织切片观察，同对照组相比，添加益生菌组的肠道内壁平滑、完整，肠道内皱褶增多，对提高饲料的消化吸收率和促进生长具有重要作用。
从大菱鲆肠道中筛选益生菌，在国内尚属首次。根据3株潜在益生菌的特性，研制成口服型益生菌剂，将对解决大菱鲆肠道疾病具有良好的应用前景。它不仅可以提高大菱鲆的抗病力、免疫力，也对减少抗生素的使用，提高水产品质量安全具有重要作用。