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目的16型人乳头瘤病毒(human papillomavirus type 16,HPV16),是HPV病毒中致病力最强的一种,大部分宫颈癌上皮细胞均能检测到该病毒。近期大量流行病学报告显示,在一部分口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中也检测到了HPV16,并且认为其与该疾病的发生高度相关。HPV16主要编码3种致癌基因:E5、E6和E7。目前,E6和E7蛋白的致癌功能已经被研究的很深入,致癌机制为大家所共识。但是E5基因的致癌功能则尚不明确。E5基因往往随着病毒的全基因组整合到宿主DNA后而被删除,所以多认为E5在肿瘤的形成早期发挥作用。也有研究认为,E5在宿主细胞内有很弱的转化能力。本实验主要分析16型人乳头瘤病毒E5基因(human papilloma virus type 16 E5 gene,HPV16 E5)对人口腔上皮细胞(human oral epithelial cell,HOEC)和永生化口腔上皮细胞(human immortalized oral epithelial cell,HIOEC)肿瘤相关基因表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)、p21、p53和Rb表达的影响,探究HPV16 E5在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的潜在作用机理。方法(1)将含有目的基因HPV16 E5的慢病毒载体pLOV-E5及对照病毒载体pLOV-N分别转染HOEC和HIOEC细胞,并筛选出各自稳定转染的细胞株。(2)实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RT-q PCR)和蛋白质印迹法分别检测EGFR、p21、p53和Rb基因mRNA和蛋白表达水平的变化。(3)甲基噻唑基四唑(methyl thiazolyltetrazolium,MTT)法分析HPV16 E5对人口腔上皮细胞HOEC和永生化口腔上皮细胞HIOEC增殖活性的影响。结果(1)成功的将慢病毒载体pLOV-E5和对照病毒载体pLOV-N转染入HOEC细胞和HIOEC细胞中,并获得了稳定转染的克隆株;(2)pLOV-E5转染入人口腔上皮细胞后,不能使细胞转化为永生化细胞。但是p21和p53的mRNA转录水平和蛋白表达水平均下调,EGFR的mRNA转录水平较对照组无明显变化,EGFR的蛋白表达水平较对照组显著提高。Rb基因的mRNA和蛋白表达水平较对照组均无明显变化。MTT法检测结果表明,pLOV-E5转染人口腔上皮细胞HOEC的增殖活力较对照组显著提高(p<0.05);(3)pLOV-E5转染的HIOEC细胞中,p21和p53的mRNA转录水平较对照组显著提高(p<0.05),但EGFR的mRNA转录水平较对照组无明显变化;EGFR、p21和p53的蛋白表达水平较对照组均显著提高,Rb基因的mRNA和蛋白表达水平较对照组均无明显变化。MTT法检测结果表明,pLOV-E5转染的HIOEC细胞增殖活力较对照组显著提高(p<0.05)。结论(1)HPV16 E5可以促进HOEC细胞的增殖,同时上调EGFR,下调p21和p53在HOEC细胞中的表达水平;(2)HPV16 E5同样可以促进HIOEC细胞的增殖,同时上调EGFR、p21和p53在HIOEC细胞中的表达水平