【摘 要】
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为了研究胰岛素原C肽在胰岛素前体折叠中的作用,通过基于聚合酶链式反应(PCR)的定点突变技术,对胰岛素原C肽中部富含Glycine的区域(GGGPGAG),C肽N端高度酸性的区域(EAED),C肽
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为了研究胰岛素原C肽在胰岛素前体折叠中的作用,通过基于聚合酶链式反应(PCR)的定点突变技术,对胰岛素原C肽中部富含Glycine的区域(GGGPGAG),C肽N端高度酸性的区域(EAED),C肽羧基端比较保守的五肽(EGSLQ)以及C肽两端的双碱性氨基酸残基进行了定点突变.经过包含体提取,蛋白质变性、还原,氧化复性,SephadexG-50凝胶过滤层析,反相快速蛋白液相层析等过程分离纯化得到了突变体胰岛素原,并对所纯化的目的蛋白进行了氨基酸组成分析与质谱测定,证明了目的蛋白的正确性.松弛素是一种属于胰岛素家族成员的重要多肽激素.为了研究胰岛素原C肽对松弛素折叠过程的作用,进行了人松弛素原H2及杂合体蛋白INSC-RLX(由胰岛素原C肽连接人松弛素H2的A、B链组成的单链杂合体分子)在大肠杆菌中的表达及目的蛋白质的分离纯化与分析鉴定等工作.
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