论文部分内容阅读
为了从分子水平对中国药用石斛及其混伪品进行鉴定,本文选取了核rDNAITS序列和叶绿体DNA的marK基因序列进行研究。采用改良的CTAB法提取石斛的基因组DNA,PCR产物直接测序法对17种(共32份)药用石斛的核糖体内转录间隔区ITS全序列进行测定,克隆测序法对12种(共22份)药用石斛的叶绿体的matK基因序列进行测定,运用BioEdit,MEGA4.0等生物软件分析了石斛属植物的rDNAITS序列及叶绿体的matK基因序列的特征,比较了石斛属间、种间、种内不同居群(品种)间的序列碱基差异及遗传距离,应用邻接法构建分子系统树。主要研究结果如下:
(1)建立了17种(共32份)药用石斛rDNAITS区碱基全序列数据库,其中,ITSl的长度为228~234bp,GC含量为45.7%~53.0%,变异位点167个,占总位点67.34%,信息位点106个,占总位点42.74%,ITS2长度为241~247bp,GC含量为44.8%~55.7%,变异位点165个,占总位点66.27%,信息位点115个,占总位点46.18%。
(2)建立了12种(共22份)药用石斛的叶绿体matK基因全序列数据库,叶绿体mark基因长1410bp,变异位点51个,信息位点11个。除了存在碱基替换的遗传变异外,还存在碱基的插入和缺失。
(3)通过ITS序列比较分析了各材料间的遗传距离和碱基差异,属间的遗传距离为0.295,石斛种间的平均遗传距离为0.142,碱基相差2~156个,种内各居群间的平均遗传距离为0.002,碱基相差1~2个。属间的遗传距离大于种间的遗传距离,种间的遗传距离大于种内不同居群(品种)问的遗传距离。
(4)根据分析石斛叶绿体的matK基因序列得到,外类群(密花石豆兰)与石斛属间最小遗传距离为0.027,石斛种间的平均遗传距离为0.008,种间最大的遗传距离0.014,最小的遗传距离为0.003,碱基相差8~20个。种内不同居群(品种)遗传距离为0.001,相差1~5个碱基。
(5)利用17种石斛的全序列数据库及遗传分析软件,通过对待检种rDNAITS区进行序列测定,成功地对10个待检种进行了鉴定,并且在原植物开花后得到了验证。
(6)运用12种石斛的matK基因全序列数据库及遗传分析软件,成功地对4个待检种进行了鉴定,同样在原植物开花后得到了验证。
(7)本文利用石斛的核糖体内转录间隔区ITS序列和叶绿体的matK基因序列数据库,分别构建了NJ树,外类群与石斛属间石斛种间以及种内不同居群(品种)间均能在NJ树中明显分化开来,二者构建的分子系统树一致,为石斛的分子鉴定提供了依据。