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白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)是机体重要的抑炎因子,它的抗炎调控机制是以调控体内的炎症平衡为核心目标,但却可以被多种病原微生物运用以逃避机体的免疫识别与清除。猪圆环病毒2型(procine circovirus type 2,PCV2)是引起以断奶仔猪多系统衰竭综合征为主要特征的猪圆环病毒病的主要病原,发病猪的典型病变特点是机体免疫功能低下和淋巴细胞缺失等。PCV2感染猪的外周血和组织中高表达IL-10,作为机体重要的调控因子,IL-10在PCV2感染引发猪圆环病毒病的过程中可能发挥着重要的调控作用,但在PCV2的感染与致病过程中IL-10究竟发挥何种调控作用,IL-10对淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)的变化产生什么影响,目前还不清楚。本试验以野生型C57BL/6小鼠和il10-/-型C57BL/6小鼠为模式动物,首先通过接种PCV2建立PCV2感染小鼠模型,Real-time PCR检测PCV2在小鼠体内的复制情况,western blotting检测小鼠体内Cap蛋白的表达情况,组织切片鉴定PCV2感染小鼠模型的组织病变;然后复制il10-/-型C57BL/6小鼠的PCV2感染模型,运用流式细胞术检测小鼠体内的淋巴细胞(T细胞、B细胞和NK细胞)的亚群分布和绝对数目,通过与Mock组小鼠对比,确定il10基因缺失对PCV2感染、复制和致病过程的调控作用。研究取得如下结果。1.通过给小鼠接种PCV2成功建立了PCV2感染的野生型C57BL/6小鼠模型。小鼠滴鼻接种PCV2后,在小鼠的外周血、下颌淋巴结、肺脏和肝脏检测到PCV2 ORF2;Real-time PCR检测感染小鼠肺脏中的病毒载量显示,在PCV2感染后2周和4周时病毒DNA水平显著高于感染1周时病毒DNA水平,但感染4周时病毒DNA水平下降到2周时的一半。同时,在小鼠肺脏、肝脏和下颌淋巴结中western blotting均检测到Cap蛋白。镜下观察小鼠的组织切片可见,PCV2感染小鼠1、2和4周后肺脏组织肺泡间隔增宽,肺泡间隔有不同程度的淋巴细胞浸润,表现为间质性肺炎特征。观察小鼠淋巴结病理变化,PCV2感染后1周时,小鼠淋巴结中淋巴细胞开始出现减少;感染后2周,淋巴细胞进一步减少,但在感染后4周,淋巴结中淋巴细胞数量有所恢复。2.成功建立了PCV2感染il10-/-型C57BL/6小鼠模型。在PCV2感染野生型C57BL/6小鼠中,检测到PCV2病毒拷贝数在持续增加,而il10-/-型C57BL/6小鼠的肺组织病毒载量在感染后2周达到最高水平(**P<0.01),而在感染后4周又急剧下降(&&P<0.01),且显著低于第1周的病毒载量(*P<0.05)。western blotting检测结果显示,在PCV2感染的野生型小鼠和il10-/-型小鼠的肺脏、肝脏和下颌淋巴结中均有Cap蛋白的表达。il10-/-型小鼠在PCV2感染后肺脏的组织病理变化规律与野生型小鼠也基本相似,但是与野生小鼠相比,在PCV2接种后2周肺组织中炎性细胞浸润更加显著,而在PCV2接种后4周肺组织病变明显减轻。3.PCV2感染后分别取野生型小鼠和il10-/-型小鼠肺脏和脾脏的单个核细胞,流式检测结果如下:1)PCV2感染减少脾脏CD45+细胞,il10基因缺失能够阻止感染后4周脾脏中CD45+细胞的减少,减少感染后2周肺组织中CD45+细胞数目和增加感染后4周肺组织中CD45+细胞数目;2)PCV2感染主要增加2周时脾脏CD3+CD4+T细胞和CD3+CD8+T细胞的数目和比例,il10基因缺失主要影响感染后4周脾脏中CD3+CD4+T细胞的数目,而在整个感染过程中对CD3+CD8+T没有显著影响;3)PCV2感染增加肺脏CD3+CD4+T细胞的数目和比例,而对CD3+CD8+T细胞数目无显著影响,il10基因缺失使感染后2周肺组织CD3+CD4+T细胞数目和比例显著高于野生型小鼠,同时使感染后2周肺组织CD3+CD8+T细胞数目/比例显著高于Mock感染组和感染的野生型小鼠;4)PCV2感染不影响脾脏NK数目,il10基因缺失使感染后2周和4周脾脏NK细胞数目显著增加,同时il10基因缺失使感染后2周肺组织NK细胞比例显著减少、感染后4周又显著增加;5)PCV2感染减少野生型小鼠脾脏中的B淋巴细胞数目和比例,il10基因缺失不能改变B淋巴细胞的这一变化趋势;PCV2感染增加野生型小鼠肺脏中的B淋巴细胞数目,il10基因缺失也未能改变B淋巴细胞的这一变化趋势。综合以上结果,本研究工作成功建立了PCV2感染C57BL/6小鼠模型。通过比较PCV2感染的野生型小鼠模型和PCV2感染的il10-/-型小鼠模型,明确IL-10在PCV2感染后期机体清除感染病毒、肺组织慢性病变形成和淋巴细胞减少中所发挥的调控作用,确定IL-10缺失可使PCV2感染后期体内的病毒量减少,组织病变减轻。研究结果明确了IL-10在调控PCV2感染后体内T、B和NK细胞变化中的作用,为进一步阐明PCV2感染猪机体免疫抑制的形成机制提供了新的理论依据。