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木质纤维素类生物质是地球上最为丰富的可再生资源,随着社会的不断发展,人类对能源需求与日剧增,使利用生物技术应用木质纤维素类生物质发酵生产乙醇来替代化石燃料提供能源具有越来越重要的现实及应用价值。木质纤维原料生产乙醇的工艺中,半纤维素水解糖化后的水解液是有效发酵生产乙醇,并可降低乙醇生产成本的关键因素。
利用木质纤维素类生物质发酵生产乙醇主要包括原料的预处理、木质纤维素原料的糖化、还原糖发酵产乙醇三个步骤,因半纤维素水解后会产生大量的发酵抑制物,影响后续的发酵,因此在利用半纤维素水解发酵生产前需要对其进行脱毒处理。
本文以玉米芯为原料,利用休哈塔假丝酵母,研究其利用该种木质纤维素类物质进行发酵生产乙醇的可能性,并对玉米芯原料的预处理工艺、脱毒工艺以及发酵工艺进行了优化。
在对玉米芯预处理工艺及脱毒工艺的研究中,考察了玉米芯粉碎粒径(10-20目与20-40目)对于预处理及水解糖化的影响,以水解液中发酵抑制物质乙酸和酚类化合物的残余量为考察标准,最终确定玉米芯预处理粉碎粒径为10-20目,氨水浸泡浓度为10%,浸泡时间为24h,主要发酵抑制物乙酸含量去除率达93.4%,酚类化合物去除率为32.3%,极大地提高了玉米芯半纤维素水解液的发酵性能,减小了后续脱毒工艺的复杂程度及药品消耗量。并将脱毒流程简化为:负压蒸发、CaO过中和,2%活性炭GH-13吸附,所得脱毒水解液完全符合水解液发酵产醇要求。
通过对出发菌株休哈塔假丝酵母HDYXHT-01的耐水解液毒性驯化,提高了其发酵玉米芯半纤维素水解液产乙醇的能力,通过对稳定耐受3g/L乙酸及0.6g/L糠醛的浓度梯度平板驯化后菌株YHFK-2的正交试验,确定了玉米芯半纤维素水解液摇瓶发酵的最佳发酵条件:水解液浓缩倍数为3倍(含葡萄糖5.12g/L,木糖68.7g/L,阿拉伯糖10.19g/L乙酸0.51g/L),装液量为60mL/250mL三角瓶,发酵时间为64h,pH为5.4,接种量为8%其它发酵条件为:硫酸铵0.36g/L、磷酸二氢钾2.68g/L、酵母粉2.59g/L,MgSO4·7H2O0.1g/L,培养温度30℃,摇床转速140r/min。经过优化,乙醇平均产量达到了27.014g/L,是未经工艺优化前最高产量14.82g/L的1.82倍。
通过对出发菌株休啥塔假丝酵母HDYXHT-01耐乙醇能力的驯化,提高将其乙醇耐受能力由3%提高至4%,进一步提高了其进行高乙醇浓度发酵的潜力。
利用休哈塔假丝酵母对玉米芯半纤维素水解液进行发酵产醇具有一定的发展潜力,这为进一步利用该酵母进行乙醇生产奠定了坚实的基础。