论文部分内容阅读
目的：(1)研究红景天苷对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用；(2)研究抑制PI3K/Akt/Nrf2信号通路对红景天苷神经保护作用的影响,从分子生物学水平阐明红景天苷神经保护作用的部分机理。方法：(1)健康成年的雄性SD大鼠60只,随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)和红景天苷给药组(MCAO+Sal),制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,再灌注1h后腹腔注射红景天苷(50mg/kg)或生理盐水,连续给药6天。免疫荧光法检测大鼠脑组织TUNEL阳性细胞的表达情况,Real-Time qPCR 检测 NogoA、NgR 的 mRNA表达,Western Blot法检测Bcl-2、Caspase-3、Cleaved Caspase-3、BDNF、NGF、NogoA、NgR、Nrf2和HO-1的蛋白表达。(2)健康成年的雄性SD大鼠50只,随机分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)、红景天苷给药组(MCAO+Sal)、PI3K抑制模型组(MCAO+LY294002)和 PI3K抑制给药组(MCAO+LY294002+Sal).在脑立体定位仪的引导下,向大鼠左侧侧脑室局部注射PI3K抑制剂(LY294002)或含25%DMSO的PBS溶液,30min后制备MCAO模型,MCAO模型大鼠再灌注1h后腹腔注射红景天苷(50mg/kg)或生理盐水。24 h后取材,Real-Time qPCR检测NFα、IL-6和ⅠL-1β的mRNA表达,V Vestern Blot法检测p-IκBα、IκBα、p65、 p-Akt、 Akt、Nrf2、HO-1、Bcl-xl和Bax的蛋白表达。结果：(1)红景天苷能够减少MCAO大鼠脑组织细胞凋亡,促进MCAO大鼠Bcl-2、BDNF和NGF的蛋白表达,抑制MCAO大鼠Cleaved Caspase-3的蛋白表达,降低MCAO大鼠NogoA 和 NgR 的 mRNA和蛋白表达；同时,红景天苷可促进MCAO大鼠脑组织Nrf2和HO-1的蛋白表达；(2)红景天苷能够降低MCAO大鼠脑组织P-IκBα的蛋白表达和p65的核转录水平：红景天苷促进了MCAO大鼠脑组织p-Akt、Nrf2 和 HO-1的蛋白表达并会被LY294002逆转；红景天苷降低了MCAO大鼠脑组织TNFα、IL-6 和 IL-1β的mRNA表达并被LY294002逆转；红景天苷促进Bcl-xl的蛋白表达并抑制Bax的蛋白表达,二者都会被LY294002逆转。结论：红景天苷可减少MCAO大鼠脑组织细胞凋亡,促进神经营养因子表达和突触生长,减弱促炎细胞因子分泌,具有神经保护作用。其神经保护作用的分子机制可能与激活PI3K/Ak/Nrf2通路有关。