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心肌纤维化（myocardial fibrosis,MF）是指在正常心肌组织中胶原纤维过量积聚,胶原浓度显著升高或胶原成分发生改变。主要表现为心肌细胞肥大、心肌成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFb）增殖并分泌大量胶原蛋白。研究表明,心肌纤维化是多种心脏疾病发展到一定阶段的共同病理改变,是心室重构的主要表现之一,是心血管系统疾病的独立危险因素。可导致心肌僵硬度增加、心室舒张功能减退、心肌电生理紊乱、心律失常、冠状动脉储备下降甚至引起猝死。所以研究逆转或防治心肌纤维化的药物具有重要的理论价值。作为第三代血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitor,ACEI）,依那普利（enalapril,Ena）在抗高血压、逆转心室肥厚、心室重构等心血管疾病中发挥重要作用。近年来发现其抗心肌纤维化作用明显,但作用机制尤其是分子生物学及信号转导方面机制尚为完全清楚。因此本课题以心肌成纤维细胞为靶点细胞,从体内外两方面观察Ena抗心肌纤维化作用及作用的分子生物学和信号转导机制,旨在阐明心肌纤维化发生机制和药物干预主要靶点。研究内容如下:1.异丙肾上腺素（Iso）诱导心肌纤维化模型,观察Ena对心肌纤维化影响;检测心肌组织中羟脯氨酸含量和超氧化物岐化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平;通过HE染色、Masson特染、透射电镜、免疫组织化学染色、Western blot等方法观察Ena对心肌形态学和磷酸化丝裂酶原活化蛋白激酶p38（p38MAPK）、转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。结果表明:Ena能明显抑制Iso诱导的心肌肥厚;减少胶原纤维含量;降低羟脯氨酸含量;提高SOD含量,降低MDA水平;减少心肌组织中p38MAPK和TGF-β1的表达。2.体外培养CFb细胞,血管紧张素II（AngII）诱导增殖。采用MTT、流式细胞仪观察Ena对细胞增殖和细胞周期的影响;免疫细胞化学染色、流式细胞仪、Western blot分析Ena对细胞周期蛋白cyclinD1和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子（CDKI）p27kip1蛋白表达的影响。结果表明:Ena能够明显抑制CFb增殖,使细胞周期阻滞于G0/G1期;降低与细胞增殖密切相关的cyclinD1的表达,增加p27kip1蛋白的表达,呈剂量依赖性。3.体外培养CFb细胞,免疫细胞化学染色、流式细胞仪、RT-PCR技术检测TGF-β1蛋白表达及其mRNA、collagen I蛋白水平;对TGF-β1表达量和collagen I水平进行相关性分析。结果表明:TGF-β1 mRNA及其蛋白表达量和胶原纤维呈显著正相关,Ena通过降低TGF-β1 mRNA及其蛋白表达降低胶原蛋白含量。4.荧光显微镜、流式细胞仪观察Ena对活性氧的影响;免疫细胞染色观察Ena对磷酸化p38MAPK核转位的影响;W estern blot观察Ena对磷酸化p38MAPK表达的影响;免疫细胞荧光染色法和Western blot检测Ena对TGF-β1表达的影响。结果表明:Ena通过降低活性氧水平抑制p38MAPK核转位,降低TGF-β1表达从而起到抗心肌纤维化作用。