谷氨酰胺对脓毒症大鼠血清毒性作用的影响及其机制研究

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目的:研究脓毒症大鼠血清对巨噬细胞、内皮细胞功能的影响,以及加入谷氨酰胺(Gln)对血浆该作用的影响,探讨Gln在脓毒症中的保护作用机制。 方法: 第一部分:SD大鼠18只,随机分为假手术组(Sham)、脓毒症组(CLP)、Gln处理组(GLN)。CLP和GLN组采用盲肠结扎穿孔术(CLP)制备大鼠脓毒症模型,术后即刻从尾静脉注射Gln 0.75g/kg(GLN组)或等量生理盐水(CLP组)。6h后采血收集血清/血浆及肺组织,并将血清与RAW264.7细胞孵育4h后收集上清液。鲎试剂法定量测定血浆内毒素浓度;比色法检测血浆D-乳酸和Gln水平。酶联免疫吸附法(ELISA)测定肺组织TNF-α水平及血清作用于RAW264.7细胞后上清液中TNF-α与IL-6的水平。 第二部分:在第一部分动物实验的基础上,将各组大鼠血清与HUVEC细胞孵育8h后分别进行CCK-8细胞计数、Hoechst33342/PI荧光染色实验,以及0h、12h、24h的划痕实验。 结果: 第一部分:CLP组血浆D-乳酸水平明显高于GLN和Sham组,而GLN和Sham组无明显差异;CLP组血浆中LPS浓度显著高于Sham和GLN组,而GLN组LPS浓度又显著高于Sham组;Sham、CLP和GLN三组间Gln含量均无明显差别;CLP组肺组织中TNF-α浓度显著高于Sham和GLN组,GLN组与Sham组之间无显著差异。CLP组大鼠血清刺激RAW264.7细胞后TNF-α、IL-6释放较之Sham组显著升高,而加入GLN组大鼠血清后TNF-α、IL-6浓度较之CLP组明显下降,GLN组与Sham组无明显差异。 第二部分:CLP组HUVEC细胞的OD值显著低于Sham组,而GLN组显著高于CLP组,GLN组与Sham组之间无显著差异;CLP组HUVEC细胞的坏死率显著高于Sham组,而GLN组显著低于CLP组。但GLN组也显著高于Sham组;在0h各组细胞间的残存距离无差别,在孵育12h和24h后CLP组细胞的残存距离显著大于Sham组,而GLN组显著小于CLP组,同时GLN组也显著大于Sham组。 结论:脓毒症大鼠血清能刺激巨噬细胞释放炎症因子,能杀伤血管内皮细胞及抑制其爬行功能,而Gln能明显减轻脓毒症血清的该作用。这可能与Gln降低肠道通透性有关。
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