维拉帕米对脊髓重度损伤神经保护作用的动物实验研究

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目的:  脊髓损伤是导致残疾的主要原因。其中包括原发性和继发性损伤两种机制。其中,钙离子失衡是继发性损伤的机制之一。维拉帕米是一种钙离子通道阻滞剂,可以通过抑制细胞膜上钙离子通道发挥减少钙离子内流。目前,维拉帕米对脊髓神经系统损伤后是否发挥神经保护作用尚无相关研究报道。本研究观察维拉帕米干预后大鼠损伤脊髓的7.0T-MRI成像特征,并应用DTI扫描观察其变化特征。通过损伤脊髓的组织病理学研究观察脊髓神经元存活数及 GFAP表达的情况。探讨维拉帕米在损伤脊髓神经中的保护作用。为 SCI动物实验研究提供一定的实验技术方法,探索脊髓损伤治疗的新方法。  方法:  ⑴建立大鼠SCI模型。将42只SD大鼠随机分组,采用改良Allens法建立大鼠脊髓重度损伤模型,随机分成空白对照组和维拉帕米治疗组,每组18只,假手术组6只。采用BBB运动功能评分法,SCI前及SCI后1天、2周和4周评估大鼠后肢运动功能。⑵检测维拉帕米治疗SCI后大鼠脊髓影像学改变。术后1天、2周和4周分别行常规MRI和DTI检查。⑶检测维拉帕米治疗 SCI后大鼠脊髓组织病理学改变。采用尼氏染色观察各组大鼠脊髓神经元的表达,免疫荧光检测GFAP情况。  结果:  ①假手术组BBB评分均高于对照组及维拉帕米治疗组(P<0.001)。SCI后1天,对照组及治疗组所有大鼠评分为0分。随后时间变化评分呈逐渐升高,治疗组与对照组比较评分升高程度增高(P<0.001)。②SCI后1天及2周,T2WI表现为SCI区域与周围组织边界不清的高信号影;SCI后4周,SCI区为边界清楚信号影,对照组损伤中心有不规则椭圆形高信号影;治疗组SCI中心点状高信号影。③FA成像,在2周和4周时,对照组FA均降低(P<0.01)。对照组2周及4周较1天时FA值降低(P<0.01)。ADC图像对照组在4周的ADC测量值较治疗组有升高(P<0.01);对照组比较各个时间点逐步升高,(P<0.01);治疗组2周与1天、4周有明显升高(P<0.01)。④尼氏染色神经元细胞光镜下观察呈现深蓝色颗粒,对照组与治疗组各个时间点均减少(P<0.01)。对照组2周及4周时均与1天比较神经细胞减少(P<0.01)。光镜下观察对照组2周与4周时神经元细胞排列均紊乱。⑤对照组及治疗组与假手术组比较GFAP均明显升高(P<0.01)。对照组在4周时间点GFAP测量值较治疗组有升高(P<0.01)。对照组GFAP测量值呈逐步升高(P<0.01)。治疗组随时间变化呈现先上升后下降变化,在2周时达到顶峰。  结论:  ⑴大鼠后肢运动功能评分的变化提示维拉帕米对脊髓损伤后功能恢复有促进作用;⑵7.0T-MRI发现维拉帕米治疗后DTI成像技术FA值减低减少和ADC值升高减少,且发生变化时间较常规MRI早,可应用于早期观察干预的效果;⑶组织病理学发现维拉帕米治疗后神经元存活良好,且晚期胶质生成减少,提示维拉帕米对损伤脊髓具有一定的神经保护作用;⑷动物7.0T-MRI成像技术可以应用于SCI动物实验模式的脊髓成像研究。
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