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在生命过程中,糖作为能量物质(如葡萄糖、淀粉等)和结构物质(如纤维素、壳聚糖等),早已为人们所熟悉。近年来发现,不少真菌多糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎症、降血压、降血脂等多种生物活性,其通过免疫调节作用抑制肿瘤细胞的生长,并且对正常细胞毒性极低。通过化学修饰可以显著提高多糖的生物活性,甚至赋予新的生物活性。据报道,多糖的硫酸酯化对多糖的免疫细胞活性、抑制肿瘤等生物活性等有很大影响,但是国内外未见猪苓多糖硫酸酯化的相关研究与报道,本实验首次制备得到猪苓多糖硫酸酯,具有创新性。 本论文主要研究内容如下: 1.通过正交实验优化了猪苓多糖的提取工艺,从猪苓子实体中成功分离出水溶性猪苓多糖(Polyporus umbellatus polysaccharides,简称为pps),通过红外光谱分析等方法,进行了验证,并通过尺寸排除色谱与激光光散射联用装置(SEC-LLS)得到pps的重均分子量M_w=1.6×10~5 Del。 2.运用苯酚-硫酸法测得pps的总糖含量为89.7%,并通过GC分析pps的单糖成分,实验表明其主要是由D-葡萄糖和少量的D-半乳糖、D-甘露糖所组成。 3.采用氯磺酸—吡啶法对提取的pps进行硫酸酯化,制备了猪苓多糖硫酸酯(polyporus umbellatus polysaccharides sulfate,简称为ppss)。通过是否加入分散剂N,N-二甲基甲酰胺将多糖分散,得到两种酯化多糖ppss-1、ppss-1’。比较分散剂对酯化结果的影响,结果显示加入分散剂对酯化收率有很大的提高,硫酸多糖中硫酸基的含量有所下降,相应的取代度也较低,且所得到多糖硫酸酯分子量会有所降低,但是对水溶液的黏度有一定的提高,通过红外图谱可知酯化后的结构没有很大差异。 4.测定了pps、ppss-1、ppss-1’的水溶液浓度在1mg/ml以内其溶液的黏度—浓度表现为牛顿流体行为。 5.通过免疫实验,结果表明,酯化后的猪苓多糖能够显著增强小鼠的免疫活性。分散剂的加入也有利于增强猪苓多糖的免疫活性。 上述对pps提取以及稀溶液粘度行为的基础研究提供了一定科学数据,通过免疫实验验证了硫酸酯化后提高了pps的免疫活性,也为pps的衍生化研究提供科学数据,不仅具有重要学术价值,而且也为pps的硫酸酯化衍生物在食品、医药等领域中的应用提供了重要的科学依据。