【摘 要】
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乙型肝炎病毒(HepatitisB Virus,HBV)属嗜肝DNA病毒科,是引起病毒性肝炎的主要病原之一.慢性乙肝炎病人的细胞免疫低下,难以清除体内持续存在的病毒.所以该研究主要从提高机
【出 处】
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中国预防医学科学院 中国疾病预防控制中心
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乙型肝炎病毒(HepatitisB Virus,HBV)属嗜肝DNA病毒科,是引起病毒性肝炎的主要病原之一.慢性乙肝炎病人的细胞免疫低下,难以清除体内持续存在的病毒.所以该研究主要从提高机体细胞免疫的角度出发,探索治疗慢性乙型炎的T细胞疫苗.首先,以PCR法,克隆出带有多个T、B细胞表位的核心抗原(1-144aa)与前S1抗原(1-42aa)的融合基因,并构建 了原核表达载体pET-11dCS1,通过诱导,成功地表达了该基因片段,表达量占菌体总蛋白的20i左右.为了进行下一步的动物免疫效果的观察,对原核表达的该融合蛋白进行了纯化条 件及抗原性的研究.为了检测动物在给以抗原免疫后的细胞免疫效果,将该融合基因片段又克隆入真核表达载体pCDNA3,获得了pCDNA3CS1阳性克隆,用脂质体传染的方法将该质粒转 入淋巴细胞瘤细胞P815,经G418加压筛选,得到了表达目的抗原的P99-815细胞系,作为CTL作用的靶细胞,该细胞系正在申请国内专利.最后,用以上纯化获得的融合蛋白进行动物免疫,并且在初次免疫后的第三周加强一次.同时与单独及联合免疫表面抗原的动物进行比较,测定了他们的细胞免疫和体液免疫.细胞免疫结果发现CSI融合蛋白能诱导机体产生较强 的CTL反应,而对照产单独免疫当归的动物和用表面抗原免疫的动物,虽然产生一定的反应 但强度较低.从体液免疫的结果上也以能反映出该融合蛋白有较强的免疫原性.
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