论文部分内容阅读
第一部分、BDNF Va166Met功能多态性位点在颞叶癫痫发生中的作用 背景：颞叶癫痫(temporal lobe epilepsy，TLE)是一种慢性神经疾病，以起源于大脑颞叶的反复的痫样发作为特征。TLE作为一种复杂的中枢神经系统疾病，其发生和发展受到遗传因素和环境因素的共同影响，其中，易感基因对TLE的发生和临床的不同表型起着重要作用。大量研究表明脑源性神经营养因子(brain derived neurophicfactor, BDNF)基因多态性与癫痫等许多神经系统疾病的发生。然而，BDNF Va166Met多态性是否与TLE的发生相关一直存在着很大的争议。本文主要探究BDNFVa166Met这一功能多态性位点与TLE的发生和其临床表型的关系、以及不同基因型的BDNF Va166Met对其特异性受体蛋白TrkB活性的影响。 方法：以北方汉族人群TLE患者和非癫痫对照组为研究对象，采用病例-对照的研究方法，应用TaqMan法检测BDNF Va166Met多态性与TLE的发生及其临床表型的关系，利用PCR及定点突变PCR技术扩增不同多态性位点的BDNFval和BDNFMet基因序列，构建含目的片段的表达载体，转染293T细胞后，通过Western Blot的方法检测不同基因型的BDNF Va166Met多态性位点的受体蛋白TrkB的表达水平。 结果：在499例TLE患者和1181例非癫痫对照受试者中，BDNF Va166Met功能多态性位点在TLE患者组的Met等位基因频率低于非癫痫对照组(43.9％ vs48.6％，P=0.012，OR=0.83，95％CI=0.71-0.96)，在颞叶癫痫伴海马硬化患者中Met66等位基因携带者组的频率显著低于非携带者组(20.5％ vs29.1％，P=0.040)。不同基因型的BDNF Va166Met多态性位点激活的受体蛋白TrkB的表达水平没有差异。 结论：本研究表明BDNF Va166Met功能多态性位点可能与TLE的发生相关，其中Met66等位基因是TLE发生的保护因素。 第二部分、儿童良性癫痫伴中央颞区棘波患儿GRIN2A基因突变分析 背景：儿童良性癫痫伴中央颞叶棘波(benign epilepsy with centrotemporal spikes，BECTs)是一种特发性局部癫痫综合征，发病年龄一般在3岁和13岁之间，是儿童期最为常见的癫痫综合征。BECTs有较高的遗传倾向，但在之前的研究中一直都没有确定其遗传基因，被认为是低外显率的常染色体显性遗传病。最近的研究发现，GRIN2A基因突变能够引发包括BECTs在内的癫痫失语综合征。本研究对35例BECTs患儿的GRIN2A基因扩增后进行Sanger测序，从而探究中国汉族人群中BECTs患儿GRIN2A基因突变情况。 方法：提取35例患儿外周血基因组DNA，应用PCR技术扩增GRIN2A基因的12个外显子及其侧翼区序列。扩增产物用Sanger法进行测序，寻找基因突变，并用生物信息学在线软件评估GRIN2A基因突变对蛋白结构和功能的生物学的影响。 结果：Sanger法测序在35例散发BECTs患者中发现1例患者携带GRIN2A基因的突变，该突变为c.C989T(p.P330L)杂合错义突变，为一种新发现的GRIN2A基因突变。 结论：GRIN2A c.C989T(p.P330L)错义突变可能影响GRIN2A蛋白保守氨基酸序列结构，是该基因新发现的一个致病突变位点。