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本文利用PCR技术克隆榕小蜂核糖体28S、线粒体细胞色素b(Cytb)、细胞色素氧化酶I(COI)基因序列和相关序列扩增多态性(SRAP)分析方法,结合GenBank中相应序列对薜荔和爱玉子的传粉小蜂(Wiebesia pumilae)、大叶榕(Ficus virens var.sublanceolata(Miq.)Comer)榕果中非传粉小蜂(Camarothorax bimasculinus)、传粉小蜂(Platyscapa coronata)、高榕(Ficus altissima)传粉小蜂(Eupr&tina altissima)的突变类型、核苷酸多态性、种内平均遗传距离以及系统进化等进行比较分析。主要研究结果如下:
1.28S分析结果显示:①碱基组成计算结果表明,各样品间的碱基组成差别不大,A、G、T、C的平均含量为22.2%、30.08%、22.51%、25.20%,GC含量平均为55.28%,略高于AT;②进行Kimura2-paramter distance(K2P)遗传距离计算,爱玉子传粉小蜂样品间的平均遗传距离0.0161;薜荔传粉小蜂样品间的遗传距离为0.0103;爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂之间的平均遗传距离0.0532;而C.bimasculinus的两形态差异很大的雄性小蜂间的遗传距离仅为0.0069;⑨运用NJ和UPGMA法建树分析,爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂分别聚集呈簇,形态差异较大的雄性小蜂亲缘关系较近。结果表明:爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂之间的变异主要来自群体间,C.bimasculinus的不同雄性小蜂间的亲缘关系近,为雄性多型现象,NJ法和UPGMA法构建系统进化树同样说明了以上的结论。
2.线粒体Cytb、COI分析结果显示:(1)对Cytb基因片段的测序结果进行如下分析:①进行碱基组成的计算表明,各样品间碱基的差异不大,所有实验样品A、G、T、C的平均含量为32.9%、11.2%、41.9%、14.1%,平均GC含量为25.3%,呈现出了较低的GC含量,G碱基的含量要低于其它三种碱基的含量,总体上显示出了G碱基的缺乏;②测序结果进行基因序列分析,爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂基因之间的保守位点为86.67%,变异位点为13.09%;③进行K2P遗传距离计算,爱玉子传粉小蜂间的平均遗传距离0.0244,薜荔传粉小蜂间的遗传距离为0.0097,两群体间的平均遗传距离0.1305;④运用NJ和UPGMA法建树分析。(2)对COI基因片段的测序结果进行如下分析:①进行碱基组成的计算,A、G、T、C的平均含量为31.5%、16.9%、40.6%、11.0%,平均GC含量为27.9%,其中密码子第三位点上C碱基的含量要低于其它三种碱基的含量,显示出了C碱基总体含量的缺乏;②测序结果进行基因序列分析,爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂之间的保守位点占89.08%,变异位点占10.92%;③进行K2P遗传距离计算,爱玉子传粉小蜂样品间的平均遗传距离0.0068,薜荔传粉小蜂样品间的遗传距离为0,两群体间的平均遗传距离0.0956,是个群体内遗传距离的10倍以上;④运用NJ和UPGMA法建树分析。以上数据说明,两个基因片段的建树结果都显示爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂的亲缘关系是稳定可信的,爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂均达到物种分异的水平,可认定为隐种。
3.SRAP分析结果显示:在筛选出来的17对随进引物对12个样品进行PCR扩增,共获得491个位点,扩增条带主要在100-2000bp之间,两群体间的平均遗传距离0.210908,平均遗传相似指数在为0.789092;C.bimasculinus的两雄性之间的遗传距离为0.150713,遗传相似指数为0.849287。结果显示:爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂之间的遗传距离较近,由于种内遗传距离一般小于0.2,种问遗传距离一般在0.2-0.8之间,所以,爱玉子传粉小蜂和薜荔传粉小蜂已达到了物种分异程度;同样,C.bimasculinus的两种雄性之间的亲缘关系较近,为同种。通过Ntsys软件生成的聚类结果也符合以上结论。
综上所述:结合28S、线粒体Cytb、COI及SRAP分析结果显示,分别与爱玉子和薜荔共生的传粉小蜂间已达到物种分异程度,为隐种;两种形态差异很大的C.bimasculinus雄性小蜂为雄性多型现象。