论文部分内容阅读
刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种专性细胞内寄生的机会性致病原虫,其生活史及致病机理复杂,人类对弓形虫普遍易感,孕妇感染弓形虫后可导致胎儿先天性弓形虫病,严重可致畸胎,死胎,在AIDS,恶性肿瘤等免疫力低下患者中,弓形虫作为一种机会性感染因子,是引发致死的病因之一。目前尚无有效治疗弓形虫病的药物。因此,弓形虫病的预防尤为重要。对弓形虫疫苗的研究经历了死疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗以及DNA疫苗,DNA疫苗可同时诱导细胞免疫和体液免疫,但其诱导免疫反应的效率相对较低,尤其对于大型动物种系和人类。为提高DNA疫苗诱导的免疫反应的强度,构建基因佐剂成为一种替代方法。免疫刺激序列为非甲基化的短核苷酸重复序列,即CpG基序,是目前广被接受的一种基因佐剂,CpG基序在细菌,病毒的DNA中普遍存在,研究表明,人工合成的非甲基化CpG基序同样能通过Toll样受体9直接活化B细胞,诱导其增殖并抑制其凋亡,并能促进免疫球蛋白和IL-6, IL-10, IL-12等细胞因子分泌。在寄生虫等感染性疾病中,CpG序列可在动物体内激发强烈的Th1型相关反应,在寄生虫病预防的研究中,CpG的应用也不乏成功的例子。由于质粒DNA分为两个明显的功能单位,一个是转录单元指导抗原表达,一个是DNA骨架中的佐剂单元(CpG基序),诱导免疫反应激活。在质粒DNA骨架中适量增加CpG基序数量,可增强DNA疫苗的免疫效应。SAG1抗原作为弓形虫速殖子期特异的主要表面抗原之一,具有高度的免疫原性和免疫保护性,是弓形虫感染免疫诊断和疫苗开发的的主要候选抗原。SAG1蛋白分布于弓形虫速殖子表膜、速殖子内以及纳虫泡的管状结构中,约占弓形虫体总蛋白的3-5%,却可抑制患者血清中抗体活性的50%,是诱导宿主免疫应答的主要靶抗原。ROP2蛋白是弓形虫棒状体分泌的一种蛋白,主要协助虫体入侵宿主细胞,在弓形虫生活史的速殖子期、缓殖子期和子孢子期中均有表达,具有高度的保守性和免疫原性。SAG1和ROP2在虫体入侵宿主细胞的过程中有相互促进作用,其相应的抗体可有效拮抗弓形虫的感染。本研究根据已报道对小鼠有免疫刺激作用的免疫刺激序列,设计并合成一段含三对免疫刺激序列的核苷酸,作为内源性佐剂插入质粒pcDNA3.1中,构建质粒pcDNA3.1/GpG作为DNA疫苗载体,再与弓形虫抗原基因片段SAG1-ROP2相连,以重组质粒肌肉注射免疫小鼠,观察基因疫苗与佐剂的免疫效果。结果表明,增加CpG基序的基因疫苗的免疫效果优于对照组,且以细胞免疫为主。CpG基序作为内源性佐剂可增强免疫效应。