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粉红螺旋聚孢霉（Clonostachys rosea，又名粉红粘帚霉Gliocladium roseum）是一类重要的菌寄生真菌，可以防治核盘菌、灰葡萄孢、镰刀菌、立枯丝核菌等引起的多种植物真菌病害，同时还可以促进作物生长，在温室和田间试验中广泛应用，具有巨大的生防潜力。但目前尚未见该菌寄生核盘菌菌核分子机制的报道。为阐明粉红螺旋聚孢霉寄生菌核机制，筛选菌寄生相关基因，本研究以实验室前期分离得到的一株高效粉红螺旋聚孢霉菌株67-1为材料，通过高通量测序技术分别获得了67-1全基因组序列和寄生核盘菌菌核转录组信息，并研究了其脂滴包被蛋白基因per3、几丁质酶基因chi67和单加氧酶基因mono67在寄生菌核过程中的作用。 本研究以67-1菌丝为材料，提取基因组DNA后进行全基因组测序和分析。首先构建了三个PE文库（170 bp，300 bp和500 bp）和1个MP文库(5kb)，采用Illumina Hiseq2500平台进行测序，测序覆盖度大于150×，对序列进行组装后共得到1，552个contigs（重叠群），N50为99，664bp。这些contigs继续组装形成475个scaffolds，N50为569，489 bp。最终组装信息表明，67-1基因组大小为55.4 Mb，G+C含量为49.2％。通过Fgenesh软件分析，共预测出20，747个基因，与NCBI NR数据库比对，共有13，474个找到同源序列。67-1基因组序列信息为后续研究其与植物病原真菌的互作提供分子基础。 为研究粉红螺旋聚孢霉67-1寄生核盘菌菌核分子机制并筛选寄生相关基因，本研究利用高通量测序和实时荧光定量PCR技术筛选获得了67-1寄生核盘菌菌核不同时间间隔(8h、24 h和48 h)的差异表达基因。转录组测序和分析表明共得到26，351个单值基因，其中有18，525个基因可以注释到NR、KEGG、Swiss-Prot、GO和COG数据库。在3个寄生时间段分别有3，217、4，025和4，274个基因上调表达，2，739、1，249和1，064个基因下调表达。对差异表达基因进行实时荧光定量PCR检测，发现菌核诱导下12个基因明显上调表达，与转录组分析一致，为研究粉红螺旋聚孢霉寄生相关基因提供候选基因。 内参基因是应用实时荧光定量PCR精确检测基因表达量的基础。为了筛选67-1寄生菌核过程中稳定表达的内参基因，本研究选择了7个真菌常用的管家基因，18S核糖体蛋白基因(18S rRNA)肌动蛋白基因（Actin），β-微管蛋白基因（β-tubulin），延伸因子基因(Elongation factor)，泛素基因（Ubiquitin），泛素结合蛋白基因（Ubiquitin-conjugating enzyme）和甘油3-磷酸脱氢酶基因（Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase），通过geNorm、Bestkeeper和Normfmder三个常用内参基因表达稳定性分析软件进行分析，发现延伸因子基因表达在不同阶段均最为稳定，可以用于67-1寄生核盘菌菌核相关基因的定量。 本文通过67-1寄生菌核转录组数据分析，得到一个编码脂滴包被蛋白的基因per3、一个几丁质酶基因chi67和一个单加氧酶基因mono67，这三个基因均在菌核诱导下显著上调表达。通过全基因组信息获得3个基因全长DNA序列。分别对per3和chi67过表达，发现突变菌株对菌核的寄生能力显著提高，16 h达到100％。防治大豆菌核病温室盆栽试验表明，per3转化子6-4防治大豆菌核病效果最好，达到76.5％，比野生菌株和多菌灵分别高23.8％和20.9％。这是脂滴包被蛋白在菌寄生菌中首次作为生防因子的报道。chi67转化子在16h时对菌核寄生力比野生菌株高130％，对大豆菌核病防效分别比野生菌株和多菌灵高31.7％和28.7％，且产几丁质酶能力是野生菌株的2.4倍。对mono67基因进行敲除验证，利用同源重组原理构建了mono67敲除载体，并成功获得了敲除突变株△mono67。室内和温室生测表明，△mono67对核盘菌菌核的侵染起始时间与野生菌株基本一致，但寄生水平由野生菌株的四级降为三级，并且对盆栽大豆菌核病的防效明显下降。相关研究为进一步开发寄生相关基因提供基础。