枳椇子中总黄酮提取与分离纯化工艺的研究

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药食两用植物的有效成分一直是生物制药和保健食品的重要原料,黄酮类化合物作为重要的天然活性有效成分已成为生物医药领域研究的重点和热点。枳椇子,富含生物黄酮,具有保肝、解酒等多种药理作用。高纯度枳椇子黄酮提取物产品在国际市场倍受青睐。为满足生物医药及功能食品开发市场的需求,针对枳椇子总黄酮粗品生产中存在的生产效率低、产量低、纯度不高等问题,本文研究了枳椇子总黄酮的提取与分离纯化工艺。本研究分别采用超声波辅助法和乙醇回流提取枳椇子总黄酮,以单因素和响应面法为基础,优化各工艺条件。两种提取方法的优化工艺比较试验结果显示,超声波辅助提取法得到的总黄酮得率为3.528%,乙醇回流提取法提取得率为3.345%,较前者降低了0.183%。且与乙醇回流法相比,超声波辅助法具有省时、高效的优点,且不会给后续的分离工作带来不利影响。本课题通过静态吸附实验,比较了4种不同型号的大孔树脂对枳椇子总黄酮的吸附性能,筛选出适合枳椇子总黄酮分离纯化的AB-8型大孔树脂。经动态吸附实验得出AB-8型大孔树脂分离纯化枳椇子总黄酮的最佳工艺参数为:上样浓度为0.4mg/ml,上样速率2BV/h,pH=4;且用8BV的体积分数为70%乙醇以1.5BV/h的流速进行洗脱,可基本将枳椇子中总黄酮从AB-8型树脂上解析下来,回收率可达到91.17%。本文还建立了测定枳椇子总黄酮粗提取和纯化物中二氢杨梅素含量的高效液相色谱测定方法,其色谱条件为:色谱柱Hypersil C18柱(4.6mm×250mm,5um);流动相为甲醇-水-磷酸(27:73:0.2);流速1mL/min;检测波长为290nm;柱温25℃;进样体积为20uL。通过对纯化前后HPLC图谱的比较发现,枳椇子提取液经纯化后,其中保肝成分二氢杨梅素得到了富集,含量为17.02%,纯化效果显著。
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