【摘 要】
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目的:本研究旨在探讨二甲双胍对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞凋亡的影响。明确二甲双胍诱导PTC细胞凋亡的最低有效药物浓度,以及二甲双胍诱导PTC细胞凋亡是否通过AMPK通路并且由凋亡蛋白Caspase-9介导。方法:采用细胞实验的研究方法,体外培养人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞。用不同浓度(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L
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目的:本研究旨在探讨二甲双胍对甲状腺乳头状癌(papillary thyroid carcinoma,PTC)细胞凋亡的影响。明确二甲双胍诱导PTC细胞凋亡的最低有效药物浓度,以及二甲双胍诱导PTC细胞凋亡是否通过AMPK通路并且由凋亡蛋白Caspase-9介导。方法:采用细胞实验的研究方法,体外培养人甲状腺乳头状癌细胞系TPC-1细胞。用不同浓度(0mmol/L、5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L)二甲双胍分别处理TPC-1细胞24小时,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖能力;然后选择起始有效浓度二甲双胍,分别作用于TPC-1细胞24h、48h、72h,再次行MTT法检测细胞增殖能力。Annexin V-FITC/PI流式细胞术检测不同浓度二甲双胍对TPC-1细胞凋亡的影响,然后选择起始有效浓度二甲双胍,分别作用于TPC-1细胞24h、48h、72h,再次行流式细胞术检测其对TPC-1细胞凋亡的影响。同时在40mmol/L组加入AMPK特异性抑制剂Compound C,再次观察其对TPC-1细胞凋亡的影响;Western blot法检测磷酸化AMPK(p-AMPK)及半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9(Caspase-9)蛋白的表达。应用SPSS17.0统计软件处理数据,P<0.05为差异有统计学意义。结果:二甲双胍作用24h后,与0mmol/L组比较,5mmol/L组的TPC-1细胞增殖能力无明显改变(P>0.05);而10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L二甲双胍组均可明显抑制TPC-1细胞的增殖能力,且呈剂量依赖性(P<0.05)。与10mmol/L二甲双胍干预0h相比,24h、48h、72h均可有效抑制TPC-1细胞增殖活性,且呈时间依赖性(P<0.05)。与5mmol/L二甲双胍干预0h相比,作用24h后对TPC-1细胞增殖能力无明显改变(P>0.05),而作用48h、72h后均可有效抑制TPC-1细胞增殖活性,且呈时间依赖性(P<0.05)。二甲双胍作用24h后,与0mmol/L组比较,5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L二甲双胍组均可明显增加TPC-1细胞凋亡率,且呈剂量依赖性(P<0.001)。与5mmol/L二甲双胍干预0h相比,24h、48h、72h TPC-1细胞凋亡率均明显升高,且呈时间依赖性(P<0.001)。40mmol/L组加入Compound C后,TPC-1细胞凋亡率较前明显下降(P<0.001)。与0mmol/L组比较,5mmol/L、10mmol/L、20mmol/L、40mmol/L组p-AMPK、Caspase-9表达量均增加,且p-AMPK表达量的增加呈二甲双胍浓度依赖性(P<0.05)。结论:二甲双胍可诱导甲状腺乳头状癌TPC-1细胞凋亡,在本实验中二甲双胍诱导TPC-1细胞凋亡的最低有效药物浓度为5mmol/L;二甲双胍诱导TPC-1细胞凋亡的过程与激活AMPK通路有关,并由Caspase-9介导。
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