【摘 要】
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本研究选择3个氯霉素类药物耐药基因（cat1、cmlA、flor）作为扩增目的基因，建立了单重PCR检测方法，应用该方法筛选出了一株同时携带cat1、cmlA、flor三种耐药基因的阳性菌株（SLPE3-
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本研究选择3个氯霉素类药物耐药基因（cat1、cmlA、flor）作为扩增目的基因，建立了单重PCR检测方法，应用该方法筛选出了一株同时携带cat1、cmlA、flor三种耐药基因的阳性菌株（SLPE3-1）以作为试剂盒阳性对照株。本研究对氯霉素类药物耐药基因三重PCR反应体系条件进行了优化，结果显示，最佳反应体系为：在25μl体系中，10×PCR Buffer2．5μl，MgCl2（25mmol／L）3μl，dNTP（2．5mmol／L）4μl，Taq DNA聚合酶0．2μl，上、下游引物（25mmol／L）cat1 0．2μl、cmlA 0．9μl、flor 0．4μl，模板2．5μl，灭菌去离子水9．8μl；最佳反应程序为：94℃预变性5min；然后进入循环：94℃变性50S、54℃退火1min、72℃延伸1min，共32个循环，最后72℃延伸5min。本研究对试剂盒特异性、敏感性、重复性和保质期进行了检测试验。结果表明：本试剂盒具特异性很强，只能特异性扩增出待检测的耐药基因；具有很高的灵敏度（2．4×104 CFU／mL）；具有很好的重复性（100％）；试剂盒在-20℃下的保质期为6个月。应用本检测方法和药敏试验方法对33株细菌的耐药性进行检测，结果表明，两者检出结果的符合率为91％。本研究应用本试剂盒对全国21个省规模化养殖场收集的417株细菌进行了氯霉素耐药基因（cat1、cmlA、flor）的检测，结果显示，各省的耐药基因检出率差异较大，三种基因的平均检出率分别为：41．5％、35．7％和37．2％。本研究率先在国内外建立了氯霉素类药物耐药基因（cat1、cmlA、flor）三重PCR检测试剂盒，并应用该试剂盒对417株细菌细菌进行了检测，了解了耐药基因在我国养殖场的分布情况，并为细菌氯霉素类耐药基因检测提供了可靠方法。
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