新疆维吾尔、汉族TLR9 SNPs与HBV基因型的相关性研究

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目的:研究新疆地区维吾尔族、汉族HBV基因型差异较大的C型和D型与其TLR9位点单核苷酸多态性(SNPs)的相关性,借此了解HBV基因型的遗传易感性和先天性免疫机制的关系,为不同民族、不同HBV基因型肝炎的预防和治疗提供理论依据。  方法:1.从新疆维吾尔族、汉族慢性HBV感染者血清中提取病毒DNA,采用实时荧光标记PCR法对其HBVDNA载量进行定量检测。2.应用PCR结合反向斑点杂交法(PCR-RDB)对HBVDNA阳性者进行HBV基因型分型。3.使用PCR结合单链构象多态性(SSCP)技术对HBV基因型分别为C型和D型的维、汉族慢性HBV感染者的TLR9基因进行单核苷酸多态性(SNP)分析,并以基因测序法予以验证。4.统计学方法:1).HBVDNA定量结果转换为常用对数值,定量资料用均数±标准误(x±)表示。2).采用SxSPSS16.0统计软件对所得数据进行分析。  结果:1.在905例慢性HBV感染者中,维吾尔族369例,包括男210例,女159例。汉族536例,其中男327例,女209例。此样本HBVDNA定量检测显示,高、中、低拷贝组中维族与汉族在人数分布中差异均有统计学意义(P<0.05);维、汉族慢性HBV感染者HBVDNA拷贝数存在男女差别,但差异无统计学意义(P>0.05);维、汉族HBVDNA载量在1-10岁组高于其他年龄段,而且在40岁之前,维、汉族的HBVDNA载量都有随年龄的增大而呈降低趋势。2.成功分型504例样本,维族260例,D型219例(84.23%),C型19例(7.31%),维族D型以绝对优势显著高于其他型别基因型。汉族244例,C型128例(52.46%),D型33例(13.52%),汉族以C型为主。3.TLR9SNP在1174、2848位点发现多态性,1174位点AB基因型,其碱基序列第一位碱基处出现G→T突变,BB基因型111位碱基出现C→T的突变;2848位点DD基因型,第71号碱基发生A→G的突变。汉族HBV慢性感染者与其对照组相比TLR91174、2848位点基因型频率分布差异有统计学意义(χ2=7.34,P<0.05;χ2=4.56,P<0.05),在HBVC基因型上两民族TLR91174、2848位点基因型频率的分布差异有统计学意义(χ2=7.05,P<0.05;χ2=10.23,P<0.05)。  结论:1.新疆维、汉族HBVDNA载量1-10岁组高于其他年龄段,40岁之前随年龄增大而降低;基因拷贝数有高、中、低分布差异;两民族HBVDNA载量性别间差异无统计学意义。2.新疆维族HBVD基因型占绝对优势,汉族以HBVC基因型为主,形成了本地区独有的构成特点,是我国一个十分特殊的HBV基因型分布带。3.新疆维汉族慢性HBV感染者TLR9SNP在-1486、-1237位点未发现多态性,1174、2848位点有多态。慢性HBV感染可能与1174、2848位点突变有关,维汉族HBVC基因型感染可能与1174、2848位点突变有关。
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