万古霉素高产菌种的推理选育及发酵工艺优化

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根据万古霉素的生物合成途径和代谢调节机理,对万古霉素产生菌东方拟无枝酸菌(Amycolatopsis orientalis)进行推理选育,旨在获得高单位菌株。首先用正交试验法优化万古霉素的发酵培养基,与原培养基相比,优化后的发酵培养基能使出发菌株A.orientalis 1-6的发酵单位提高21.5%。在此基础上,以A.orientalis 1-6为出发菌株,经过3次紫外线诱变,分别筛选0.5%乙酸钠耐性突变株、0.7%磷酸氢二钠耐性突变株和万古霉素耐性突变株,并结合自然分离纯化,最终获得高产突变株A.orientalis 7-9,其摇瓶发酵效价达4800u/ml,较出发菌株生产能力提高98%。传代试验表明,该变株的高产性能遗传性较稳定。 通过发酵培养基成份的改进,A.orientalis 7-9的摇瓶发酵单位进一步提高了14.3%。从万古霉素的摇瓶发酵着手,考察了无机盐、温度、种龄、溶氧、剪切力和可能的前体物质对万古霉素发酵的影响,结果表明:KH2PO4和KNO3的最适加量分别为0.01%、0.4%;万古霉素产生菌的最适产物合成温度为25℃;万古霉素的发酵对溶氧要求高,而对剪切力不太敏感。采用优化的发酵配方和发酵条件,并在发酵进行至48h补入0.2%乙酸钠,可明显提高效价,其摇瓶效价达6430u/ml。 以摇瓶发酵实验为基础,进行了万古霉素发酵由摇瓶到15L发酵罐的放大,15L发酵罐万古霉素发酵单位可达4996u/ml。
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