论文部分内容阅读
锡金微孔草[Microula sikkimensis(C.b.Clarke)Hemsl]是我国的特有种,广泛分布于青藏高原及其毗邻高寒地区。其主要价值在于微孔草种子油富含同国际上热销的月见草油相同的药用成分γ-亚麻酸。当前在世界范围内形成商品的仅见于月见草一种,微孔草可作为替代月见草的γ-亚麻酸新油源,但微孔草油还未有大规模的产业化生产,也未见任何对微孔草的地上部分、根及种子提油后油渣化学成分的研究报道。
因此,本研究以分布在青海省的锡金微孔草为试材,对不同的微孔草材料进行较为系统的化学成分分析,并研究其有效成分的制备工艺,旨在推动微孔草籽油的产业化生产,进一步探究微孔草的活性成分,挖掘其药用价值,为开发青藏高原特色生物资源提供依据。研究取得如下结果:
1.用水蒸气蒸馏法和超临界CO2萃取法提取微孔草挥发油,萃取压力20MPa,萃取温度40℃,萃取时间1.5h,CO2流量35 L/h,分离Ⅰ、分离Ⅱ压力差4MPa,为提取微孔草挥发油的参数。采用GC-MS法对微孔草中挥发油化学成分进行了分析,结果表明,微孔草挥发油化学成分以脂肪酸、甾族化合物、倍半萜及其含氧衍生物为主。两种提取方法所得物的质谱图有明显差异,说明两者的化学成分不同。
2.用索氏提取法和超临界CO2萃取法提取微孔草籽油。用GC和CG-MS对微孔草的籽油进行了分析。超临界CO2萃取采用4因素3水平的正交设计优化制备工艺,萃取因素包括萃取压力(21.0～27.0 Mpa)、萃取时间、萃取温度及CO2流量。方差分析结果表明,萃取压力对籽油的提取率有显著性影响(p＜0.05),而其它三个试验参数无显著性影响。确定超临界萃取微孔草籽油的最佳条件为:提取压力24.0 Mpa,提取时间3 h,提取温度45℃,CO2流量20 L/h。超临界萃取法提取微孔草特征成分-γ-亚麻酸(7.412％)、α-亚麻酸(18.018%)的含量均比索氏提取法的高。
3.对微孔草的地上部分、根和油渣用超声提取法、加热回流提取法、冷浸法进行提取,用高效液相色谱仪进行分析,确定微孔草高效液相色谱分析的检测波长为254nm,微孔草浸膏的提取方法为超声提取法,微孔草浸膏的提取溶剂为甲醇。经GC-MS分析微孔草的化学成分,微孔草的地上部分主要活性成分为有机酸类;微孔草根的主要活性成分为甾醇类,有效成分γ-谷甾醇含量为53.443%,菜籽甾醇含量为32.204%:微孔草油渣主要活性成分为脂肪酸和甾醇类,有效成分β-谷甾醇含量为17.547%。
4.用索氏提取法提取不同地区微孔草籽油,用GC-MS对其有效成分进行分析,并对色谱峰用面积归一法进行定量,计算各组分在籽油中的相对含量。结果表明,不同来源的微孔草质谱图组分峰相似性极高。不同地区微孔草籽油中的特征成分-γ-亚麻酸的含量稳定,为7.250%～7.929%,没有明显差异。油中的神经酸含量稳定为1.555%～1.792%。微孔草籽油中饱和脂肪酸的含量没有明显差异,不饱和脂肪酸的比例为89.683%～90.729%,亦没有明显差异。而亚麻酸的含量为19.222%～24.408%,表现出差异。
利用分光光度法测定不同地区微孔草根的总甾醇含量,结果表明该方法快速、简便、有较好的精密度和回收率,在波长466.5nm处有最大吸收值,样品的呈色反应明显,显色稳定。不同地区微孔草根因海拔产地不同,其总甾醇含量有较大差异,以湟源寺寨乡的根总甾醇含量最高,为59.36%。另外,同一地区不同采收期的微孔草根总甾醇含量也有差异。
提取液用活性碳脱色,以滴定法对不同地区、同一地区不同生长期、同一地区相同生长期不同部位的微孔草总有机酸进行测定。结果表明,该方法简便、快速、准确,重现性好,实用性强。不同地区的微孔草总有机酸含量有较大差异,以门源县境内中科院海北高寒草甸生态系统定位观测站周边地区的微孔草地上部分总有机酸含量最高,为4.68%。同一地区不同生长期的微孔草总有机酸的含量随着果实的逐渐成熟,成峰形变化,以花期最高。相同条件下,微孔草不同部位总有机酸含量也有明显差异。