论文部分内容阅读
乳源性生物活性肽是通过酶解酪蛋白产生的具有生物学活性的肽类化合物。由于酪蛋白资源十分丰富和廉价,通过酶解所获得的生物活性肽不仅价格便宜,安全性好,工艺简单,而且容易进行工业化生产。但是我国90年代以来才开始进行这方面的研究,和发达国家相比,还存在有一定差距。本实验通过二次通用旋转回归设计研究了一定条件下酪蛋白在酶作用下水解程度的变化规律,以及酶解物清除自由基能力和对小鼠免疫功能的影响,为乳源性生物活性肽的研究开发提供一些理论依据。 系列Ⅰ 酪蛋白的酶促水解研究 本试验通过二次回归通用旋转设计及响应面分析法研究了三因素五水平下胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解酪蛋白的反应,当底物浓度为6g/L,水解时间为1h时,温度、pH值和酶底比三因素对水解度影响的变化规律。并根据回归方程利用统计优选法寻优,确定了在一定条件下胰蛋白酶水解酪蛋白的最优条件为:温度为58℃,pH值为7.4,酶底比为0.9%;而木瓜蛋白酶水解酪蛋白的最优条件为:温度为58.53℃,pH值为5.0,酶底比为7.4%,当在最优条件时酪蛋白的水解度值最高。 系列Ⅱ 两种酶解物抗氧化性研究 本试验利用胰蛋白酶、木瓜蛋白酶对酪蛋白进行水解,制取不同时间段内的干粉,综合评价了两种酶解物不同时间段、不同浓度清除羟自由基能力和清除DPPH自由基能力。结果表明,在同一评价体系中,不同浓度的酶解物所表现出的抗氧化性不同,如胰蛋白酶酶解物在对羟自由基的清除作用中,高浓度的酶解物（1.00%）显示了强的清除羟自由基的能力,最高抑制率可达到19.50%（2h）,而低浓度的酶解物（0.001%）却显示了强的促氧化能力,可达到-54.48%（3h）。在不同的评价体系中,即使是同一浓度的酶解物所表现出的抗氧化性不同,研究发现在Fenton体系中,酶解物表现出一定的清除羟自由基的能力,而在DPPH体系中,酶解物清除自由基的能力却不明显,说明酪蛋白酶解物可能并不具有直接清除自由基的作用,推测酪蛋白酶解物清除羟自由基的作用可能是络合了Fe2+的结果。 系列Ⅲ 两种酶解物免疫活性研究 本试验采用2h时间段的两种酶解物,同时将80只小白鼠,均分为两批,每批40只。并随机均分为4组,每组10只,雌雄各半,第一组为正常对照组（Ⅰ）,每只每天腹腔注射生理盐水0.2mL,第二组为酶解物组（Ⅱ）,每只每天背部皮下注射酶解物10mg,第三组为环磷酰胺组（Ⅲ）,每只每天腹腔注射环磷酰胺1mg,第四组为环磷酰胺加酶解物组（Ⅳ）,每只每天背部皮下注射酶解物10mg,腹腔注射环磷酰胺1mg,各组小鼠每天在规定时间用药,于同等条件下饲养7天。研究发现两种酶解物对由环磷酰胺所引起的免疫器官重量下降以及白细胞数的减少具有一定的抑制作用。并且两种酶解物也能够抑制环磷酰胺所引起的花环形成率下降,虽然在三个实验结果中酶解物组（Ⅱ组）与对照组（Ⅰ组）相比差异均不显著（P>0.05）,但显示两种酶解物对小鼠的免疫活性可能具有增强趋势。