论文部分内容阅读
目的:结直肠癌是世界上最常见的癌症之一。在2012年,全世界结直肠癌发病人数超过130万,仅次于肺癌和乳腺癌,位居全部肿瘤中的第三位。男性结直肠癌患病率在所有癌症中排名第三位,而女性结直肠癌患病率在所有癌症中排名第二位。在我国,结直肠癌的发病人数与死亡人数也呈逐年上升的趋势。尽管医疗技术和治疗策略近几年取得了重大进展,仍有60%的结直肠癌病人初次诊断就已经是进展期,而有远处转移的病人5年生存率只有5%。结直肠癌的早期诊断和筛查可以降低该病的发病率和死亡率。然而在过去的几十年里,结直肠癌的诊断通常应用粪便潜血检测(FOBT)和结肠镜检查。在20世纪80年代进行的粪便潜血检测的两个实验中,便隐血的阳性率分别只有67%和60%。粪便潜血检测在结直肠癌检测中的准确性也较低。结肠镜检查也有其局限性,有创的侵入性检查,病人会遭受一定的痛苦,且费用较贵,医疗资源较少,无法在正常体检中大规模开展。因此,找到一个新的肿瘤标志物使结直肠癌能早期诊断显得至关重要。结直肠癌的起源是一个复杂的生物过程,涉及多种生物学过程的改变。大量研究发现,长链非编码RNA参与多种疾病的发生和发展,尤其是在肿瘤疾病中。长链非编码RNA还被发现与癌症发展的一系列步骤有关。近期研究显示,结肠癌相关因子-1(CCAT1)在结直肠癌、胃癌、肝癌、乳腺癌和卵巢癌中表达水平均上调。在结直肠癌中,Sana等人报道了lncRNA-uc.73和lncRNA-uc.388在结直肠癌组织中显著下调,这两个长链非编码RNA均可以成为潜在的诊断标志物和预后标志物。随着研究的深入,越来越的长链非编码RNA被发现,长链非编码RNA的数量也已经超过了编码RNA的数量。这些长链非编码RNA可以与DNA、RNA、蛋白质等相互作用,在染色质及转录和转录后调控中充当重要的调节者。本实验的目的是探究lncRNA-CTA-941F9.9在结直肠癌组织和与其配对的癌旁非癌组织中的表达情况。并研究lncRNA-CTA-941F9.9表达水平和结直肠癌病人临床病理资料以及预后的关系。材料和方法:本研究选取了2010年及2016年于中国医科大学进行了根治性切除手术的133例病人。其中74例于2010年接受了根治性切除,59例于2016年接受了根治性切除。男性64例,女性69例;结肠癌病人59例,直肠癌病人74例;结肠癌中,肿瘤位于左半结肠病人25例,肿瘤位于右半结肠病人34例。所有病人年龄均分布于28至86岁之间。全部病人术后病理都证实为结直肠癌。所有病人在术前都没有接受新辅助化疗或者放疗。我们对2010年进行根治性切除的74例病人进行随访,排除6例失访的病人,余下68例每3-6个月随访一次,截止到2015年6月。我们分别选取了病人的结直肠癌组织和与其配对的正常粘膜组织,正常粘膜组织的选取位置距离癌灶至少5厘米。所有组织样本获取后均立即放入液氮中迅速冷冻,并被放入-80°C深低温冰箱中保存。我们使用Primer premier5.0软件进行引物设计,并对细胞系RNA进行提取。提取后,使用半定量PCR扩增,随后进行琼脂糖凝胶电泳实验验证引物的准确性。我们应用实时定量PCR技术检测了133对结直肠癌组织和其配对癌旁非癌组织中lncRNA-CTA-941F9.9的表达情况,采用Wilcoxon秩检验对癌组织及癌旁非癌组织的lncRNA-CTA-941F9.9表达水平进行了比较,用非参数检验方法分析lncRNA-CTA-941F9.9相对表达水平与临床病理资料的联系,两组之间比较采用Manner-Whitney U检验(年龄、性别、肿瘤大小),多组之间比较采用Kruskal-Wallis H检验(肿瘤位置、组织学分级、组织学分型、pT分级、pN分级、pTNM分期)。我们使用Kaplan-Meier函数绘制病人的生存曲线,分析lncRNA-CTA-941F9.9相对表达水平与病人总生存期之间的联系。采用ROC曲线法评估lncRNA-CTA-941F9.9的诊断价值。结果:本研究设计并合成该长链非编码RNA的引物,并在结直肠癌细胞系中对引物进行验证,扩增产物符合预期。我们从病人病灶组织及邻近粘膜对照组织进行RNA提取,并进行实时定量PCR检测。统计结果显示:相比于癌旁非癌组织,lncRNA-CTA-941F9.9在结直肠癌组织中表达显著下降(P<0.001),ROC曲线下面积为0.802(敏感度74.3%,特异度82.9%)。然而,lncRNA-CTA-941F9.9的表达水平与年龄(P=0.984)、性别(P=0.804)、肿瘤位置(P=0.967)、肿瘤大小(P=0.112)、组织学分级(P=0.570)、组织学分型(P=0.808)、pT分级(P=0.942)、pN分级(P=0.818)、pTNM分期(P=0.849)均无显著差异。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,lncRNA-CTA-941F9.9的表达水平与病人的总生存期无关。我们按照年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤位置、组织学分级、组织学分型、pT分级、pN分级及pTNM分期分别将病人进行分组,结果显示,在各个亚组中,lncRNA-CTA941F9.9表达水平与病人总生存期之间均无统计学差异。结论:LncRNA-CTA-941F9.9在结直肠癌组织中明显下调,这意味着它可能是一个结直肠癌病人的新的诊断标志物。但我们发现,lncRNA-CTA-941F9.9的表达水平差异与病人临床病理资料并无统计学意义,lncRNA-CTA-941F9.9的表达水平差异也与病人的总生存期无关。