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指数富集配体的系统进化技术(Systematic Evolution of Ligands by Exponential Enrichment,SELEX)是20世纪90年代初发展的一种新型组合化学技术。适配子(Aptamer)是通过SELEX技术从体外合成的随机单链寡核苷酸(ss DNA or ss RNA)文库中筛选得到的一簇小分子DNA或RNA片段,能够形成特定的结构与靶标高亲和力、高特异性的结合。本研究以完整的活菌细胞为靶标,以灭活的靶标菌和几种同源关系较近的非靶标菌为反筛菌,采用SELEX技术筛选了两种食源性致病菌(金黄色葡萄球菌黄金亚种和蜡样芽孢杆菌)的适配子,建立了以适配子识别为基础的金黄色葡萄球菌黄金亚种的荧光检测技术和蜡样芽孢杆菌的电化学传感检测技术,并分别实现了对这两种食源性致病菌的快速、灵敏检测。首先,体外合成一个库容量为1014~1015、80 nt的ss DNA文库。采用SELEX和反筛SELEX(counter SELEX)技术分别以活性金黄色葡萄球菌黄金亚种和活性蜡样芽孢杆菌为靶标进行了14轮筛选,将得到的双链PCR(Polymerase Chain Reaction)产物(ds DNA)进行克隆、测序。对测序结果进行一级结构及预测二级结构的分析,将具有代表性的序列用羧基荧光素(FAM)标记后,采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)测定其亲和力和特异性。最终得到1条金黄色葡萄球菌黄金亚种的适配子,其解离常数(Kd值)为26.79±9.88 nmol/L,与靶标菌种结合的阳性率为79.1%;同时得到2条蜡样芽孢杆菌的适配子,其Kd值分别为14.09±4.83 nmol/L、21.96±6.85 nmol/L,与靶标菌结合的阳性率分别为94.36%、91.29%。其次,以金黄色葡萄球菌黄金亚种的适配子为基础,将生物素化的适配子连接到磁珠上作为捕获探针,FAM标记的适配子作为显示探针,成功构建了快速、灵敏的金黄色葡萄球菌黄金亚种的荧光检测新方法。在最优检测条件下,金黄色葡萄球菌黄金亚种的菌落个数在60~8300 cfu/m L范围内与荧光强度呈良好的线性关系,检测限为60cfu/m L,牛奶样品中的加标回收率为82.1%~108.9%。再次,以蜡样芽孢杆菌的适配子为基础,巯基化的适配子修饰于玻碳电极表面作为捕获探针,以纳米金为信号放大器,构建了一种高灵敏的无标记电化学阻抗传感检测法。在最优检测条件下,用电化学阻抗(EIS)表征电极与菌液孵育后表面电子转移电阻(ΔRet)的变化,结果显示,蜡样芽孢杆菌在101~107 cfu/m L范围内与电极表面的ΔRet呈良好的线性关系,检测限为10 cfu/m L,牛奶样品的加标回收率为93.8%~107.4%。