动源性食品中诺氟沙星的电化学免疫传感器研究

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诺氟沙星作为喹诺酮类抗菌药,在肠炎痢疾治疗方面广泛应用,但诺氟沙星会导致头昏、头痛、嗜睡或失眠,还会影响青少年的生长发育。当前检测诺氟沙星的方法很多,常用的有高效液相色谱法、液相色谱-质谱法、酶联免疫吸附法和微生物法等。但这些方法存在耗时耗力、样品前处理麻烦、实验设备昂贵等问题,因此需要开发快速、简便、灵敏的检测诺氟沙星的方法。本文以树状大分子和氯金酸为材料,通过甲酸还原的方法制备了树状大分子包裹的纳米金复合材料(PAMAM-Au),经透射电镜表征,材料粒径在5nm以内且分布均匀。该材料表面带有丰富的羧基,且内部含有金纳米颗粒,将其修饰在电极表面不仅可以用来连接更多的物质还可以增强电信号,提高实验的灵敏度。实验中,在电极上电聚合对氨基苯甲酸,使电极表面带有羧基,通过酰胺化反应使PAMAM-Au牢固的连接在电极上,通过在电极上滴加抗原、抗体等物质先后构建了两种检测动源性食品中的诺氟沙星的方法。在修饰有PAMAM-Au的电极上固定诺氟沙星抗体,滴加等体积辣根过氧化物酶标记的抗原(HRP-Ag)和目标物抗原(Ag)的混合液,构建了竞争型辣根过氧化物酶标记诺氟沙星的电化学免疫传感器,两者通过对抗体的竞争作用来实现样品中诺氟沙星的定量检测。通过对实验条件优化构建的传感器对诺氟沙星在1μgL-1-10 mg L-1的范围内有良好的线性,最低检出限为0.38 μgL-1。该方法具有良好的稳定性、选择性、重现性。通过对样品添加回收实验,方法的回收率在91.6~106.1%范围内。在修饰有PAMAM-Au的电极上固定诺氟沙星包被原,在电极表面滴加等体积抗体和目标物抗原(Ag)的混合溶液,构建了抑制型非标记的交流阻抗传感器。通过抗原与抗体结合抑制抗体与包被原的结合反应,从而根据阻抗值的变化计算抑制率可以实现对诺氟沙星的定量检测。通过对实验条件优化构建抑制型交流阻抗传感器对诺氟沙星在0.5 μgL-1-5 mg L-1的范围内有良好的线性,最低检出限(IC15)达到0.12 μgL-1,灵敏度(IC50)达到0.30 μgL-1。该方法具有良好的稳定性、选择性、重现性。通过对样品添加回收,最终得到方法的回收率在90.9-104.8%范围内。
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