角倍蚜唾液蛋白的研究

来源 :中国林业科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tjunu520
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蚜虫以特殊的刺吸式口器取食植物汁液,是重要的农林业害虫,但也有一些种类如五倍子蚜可以在盐肤木属(Rhus)植物上形成虫瘿(五倍子),是重要的资源昆虫。蚜虫唾液是蚜虫与植物相互作用的媒介,在蚜虫与寄主植物的互作中起着至关重要的作用,唾液腺是分泌唾液的器官。研究蚜虫唾液及唾液腺中的蛋白成分,将有助于揭示蚜虫-植物互作的机制,为控制有害种类的为害和有益种类的利用提供科学依据。本文主要以五倍子蚜的主要生产种――角倍蚜(Schlechtendalia chinensis(Bell))干雌为研究对象,采用蛋白质组学方法分别对唾液和唾液腺蛋白进行了检测和鉴定。对用Parafilm双层膜夹营养液法收集到的角倍蚜干雌唾液运用超滤膜浓缩法进行浓缩富集,对解剖得到的角倍蚜干雌唾液腺运用超声破碎辅助裂解液裂解的方法进行提取蛋白,对收集、提取到的唾液及唾液腺蛋白进行Bradford法定量检测,聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分离和液相色谱质谱联用(LC-MS/MS)检测,质谱检测得到的数据运用Mascot软件比对豌豆蚜(Acyrthosiphon pisum)蛋白数据库V2.1b进行检索,分析虫瘿内角倍蚜干雌唾液和唾液腺的蛋白种类和组成,为深入分析角倍蚜与寄主植物的互作关系及虫瘿形成过程提供依据。主要结论如下:(1)角倍蚜干雌唾液蛋白提取方法采用双层膜夹营养液方法,收集角倍蚜干雌唾液,分别采用沉淀剂沉淀、真空冷冻干燥和超滤膜离心三种方进行浓缩,根据Bradford法蛋白定量、SDS-PAGE和LC-MS/MS 3种检测方法的综合结果对3种浓缩方法进行评价。结果表明:超滤膜法浓缩得到的唾液蛋白在3种检测方法中的浓度、分离和分析效果均高于其他两种,在后续实验中采用此方法对角倍蚜干雌唾液进行浓缩。(2)角倍蚜干雌唾液腺蛋白收集方法利用解剖显微镜,通过对大量角倍蚜干雌的解剖,对解剖角倍蚜干雌的方法进行了优化,能够快速、准确解剖和收集唾液腺。采用超声破碎辅助裂解液处理唾液腺,通过紫外分光光度计检测、Bradford法蛋白定量、SDS-PAGE和LC-MS/MS方法对唾液腺蛋白进行定量和分离,成功提取到了唾液腺蛋白。(3)角倍蚜干雌唾液和唾液腺蛋白鉴定对通过LC-MS/MS检测得到的唾液和唾液腺肽段数据,采用生物信息学法方法进行分析,从而对唾液和唾液腺蛋白进行鉴定和分类。通过与豌豆蚜数据库进行比对,角倍蚜干雌唾液腺鉴定出有141个蛋白,唾液鉴定出有31个蛋白,其中唾液和唾液腺有17个共有蛋白。其中包含了主要的唾液蛋白,表明这两种方法均可以有效提取和鉴定角倍蚜唾液蛋白,其分析结果可以互相印证。(4)角倍蚜干雌唾液蛋白分析对角倍蚜与另外3种非致瘿蚜的唾液蛋白进行比较,有1类为共有蛋白,即氧化还原酶类,表明这类蛋白是唾液的基本功能蛋白,对致瘿蚜和非致瘿蚜均是如此。共有蛋白的存在还表明目前的唾液提取和分析方法具有较好的稳定性。角倍蚜唾液中还具有2类特异的结合蛋白,且在唾液蛋白中占有很高的比例,因为其他3种非致瘿蚜唾液中均没有鉴定出结合蛋白,因此推测这些结合蛋白可能与虫瘿的形成有关,是今后虫瘿形成机理研究的重点。(5)角倍蚜干雌唾液腺蛋白分析角倍蚜和豌豆蚜唾液腺蛋白中具有6个共有蛋白,表明本实验方法具有较好的稳定性。在141个角倍蚜唾液腺蛋白中,其中有功能注释的105个,以结合蛋白的比例最高,与唾液蛋白分析的结果一致。角倍蚜唾液腺中有4类特异存在的蛋白,且在唾液腺蛋白中占有很高的比例,在非致瘿蚜-豌豆蚜的唾液腺分泌蛋白中没有鉴定出,推测这些蛋白可能与致瘿相关,是今后虫瘿形成机理研究的重点。
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