慢病毒介导的B7-H3基因沉默对前列腺癌PC-3细胞转移侵袭能力的影响

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目的:利用构建的RNAi慢病毒感染前列腺癌PC-3细胞,筛选出稳定转染的细胞。探索B7-H3表达下降对人前列腺癌PC-3细胞转移侵袭功能的影响。方法:1、用慢病毒感染前列腺癌PC-3细胞,puromycin选择性筛选出B7-H3基因稳定沉默的细胞,并利用RT-PCR检测各组PC-3细胞的B7-H3mRNA表达情况。实验分为三组:实验组(靶向B7-H3病毒组)、阴性对照组(NC病毒组)以及空白对照组(不感染组)。2、体外迁移和侵袭实验探讨B7-H3表达下降对人前列腺癌PC-3细胞转移侵袭功能的影响。结果:1、构建的RNAi慢病毒感染PC-3细胞后,在puromycin浓度为1.0μg/ml筛选出的稳定转染的PC-3细胞。RT-PCR结果显示,空白对照组与阴性对照组相比,无统计学差异,实验组和对照组相比,P<0.01统计学意义,B7-H3的mRNA表达强度下降,实验组对B7-H3mRNA表达抑制率为80%。2、体外迁移实验和侵袭实验显示:实验组过膜细胞数少于空白对照组及阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.01),说明实验组细胞转移和侵袭能力下降。而对照组及阴性对照组两组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:构建B7-H3特异的RNAi慢病毒表达载体能有效抑制B7-H3基因的表达,可满足后续实验需要;B7-H3表达下降可以明显抑制PC-3细胞的转移和侵袭能力,说明B7-H3在肿瘤的迁移及侵袭过程中可能起了重要的作用。
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