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逆境胁迫因子主要有干旱、盐渍、低温、水涝等,是限制植物生长和区域分布以及影响农作物产量和质量的重要因素。植物对这些逆境胁迫的适应主要被转录因子和调节基因(诸如控制多重抵御的酶、蛋白等)所介导。现有研究证明,与转录因子活力有关联的是转录辅激活子,它能增强转录因子和顺式作用元件的结合。MBF1是一个转录辅激活子,通过一个激活物和一个TATA盒结合蛋白的桥连作用来调节转录激活。MBF1基因最早是在蚕、果蝇等动物体中被发现,后来在植物中也发现了MBF1基因。据报道,在拟南芥中的MBF1基因的超表达能增强其抵抗逆境胁迫的能力,而在番茄中关于此基因还没有相关的报道,本论文拟通过在番茄中超表达MBF1基因研究其对逆境胁迫的抗性能力,从而明确MBF1基因的分子作用机制,主要研究内容及结果如下:1.番茄MBF1基因的克隆以AC++番茄果实的总RNA为模板,体外反转录合成cDNA,以cDNA为模板,通过PCR扩增得到得632 bp大小的片段,将其命名为LeMBF1,并登录NCBI GenBank,登录号为EF051474。将其与拟南芥中的MBF1基因进行同源性比较,在氨基酸水平上的序列相似性为82%,是一个新基因。2. Northern杂交技术分析番茄LeMBF1基因的表达特性克隆番茄MBF1(LeMBF1)基因特异片段,以此作为探针,通过Northern杂交技术分析LeMBF1基因的表达特性,结果显示LeMBF1基因的表达能被高温、干旱诱导,被复水所影响,同时LeMBF1基因的表达水平也在Nr (Never-ripening, Nr)番茄and rin(ripening inhibitor, rin)番茄中被检测。外源乙烯处理绿熟期果实,LeMBF1基因的表达变化不明显,说明在这一时期外源乙烯并不诱导LeMBF1基因的表达。3.双元超表达载体pBIN19-MBF1的构建验证的LeMBF1基因与经Pst I酶切的pDH51载体通过T4 DNA连接酶连接,连接产物转经PCR以及酶切鉴定确为重组中间载体质粒,且外源片段方向正确,命名为pDH51-MBF1。中间载体pDH51-MBF1经EcoR I酶切获得了包含35S启动子、MBF1基因、35S终止子的片段,此片段与经EcoR I酶切的pBIN19载体连接,连接产物经PCR及酶切鉴定确为重组植物双元表达载体质粒,命名为pBIN19-MBF1。4.再生番茄植株的获得以AC++番茄子叶为外植体,通过农杆菌LBA4404介导,将CaMV 35S启动子调控下的LeMBF1转入番茄,经过50 mg/L Kan及500 mg/L的Sm筛选,获得一部分生根的再生植株。