【摘 要】
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目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后灯盏花素联合运动训练对抑制神经元过度自噬的影响,初步探讨灯盏花素联合运动跑台训练对大鼠脑卒中后神经元过度自噬的作用机制研究。方法:对成年雄性SD（Sprague Dawley）大鼠,制备大鼠左侧大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,进行随机分组:假手术组（Sham组）、生理盐水组（MCAO+Saline组）
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目的:观察大鼠脑缺血再灌注损伤后灯盏花素联合运动训练对抑制神经元过度自噬的影响,初步探讨灯盏花素联合运动跑台训练对大鼠脑卒中后神经元过度自噬的作用机制研究。方法:对成年雄性SD（Sprague Dawley）大鼠,制备大鼠左侧大脑中动脉阻塞（middle cerebral artery occlusion,MCAO）模型,进行随机分组:假手术组（Sham组）、生理盐水组（MCAO+Saline组）、MCAO后运动跑台训练组（MCAO+Exercise）、灯盏花素注射液低剂量组（MCAO+0.1mg/ml Bre）、灯盏花素注射液中剂量组（MCAO+0.2mg/ml Bre）、灯盏花素注射液高剂量组（MCAO+0.4mg/ml Bre）灯盏花素注射液联合运动跑台训练组（MCAO+0.1mg/ml Bre+Exercise）。Sham组和MCAO+Saline组大鼠不进行跑台训练,MCAO+Exercise组和MCAO+0.1mg/ml Bre+Exercise组大鼠进行强度逐渐递增的运动跑步训练,30 min/d,持续7d,在大鼠脑缺血再灌注损伤后1、3、7天时,分别使用Foot-fault test、神经功能缺失评分、转棒疲劳测试等行为学方法来评估大鼠神经功能恢复情况和运动功能改善。在第7天时通过焦油紫染色法检测脑卒中后大鼠脑梗死半影区神经元损伤情况;在3、7天时综合运用Western Blot检测自噬相关蛋白的表达水平,第7天应用免疫荧光技术对自噬和凋亡细胞定位。结果:1、确定了灯盏花素最优剂量0.1mg/ml Bre作为后续实验的干预剂量。2、与MCAO+Saline组相比,MCAO+Exercise组、MCAO+0.1mg/ml Bre组和MCAO+0.1mg/ml Bre+Exercise组的大鼠神经功能缺失症状明显缓解,MCAO+Exercise组相比于MCAO+0.1mg/ml Bre组和MCAO+0.1mg/ml Bre+Exercise组更能改善神经功能的恢复,提示我们两者联合的组不一定效果就更好。3、Western Blot和免疫荧光结果显示,灯盏花素联合运动跑台训练抑制了神经元的自噬相关蛋白的表达,并且减少凋亡蛋白的表达。4、灯盏花素联合运动跑台训练抑制了自噬相关蛋白的表达,同时JNK2蛋白表达也减少,提示我们抑制过度自噬可能是通过调控JNK的相关通路。结论:1、脑缺血后灯盏花素联合运动跑台训练促进神经功能改善。2、脑缺血后灯盏花素联合运动跑台训练能够抑制神经元过度自噬相关蛋白的表达。3、我们得出灯盏花素联合运动跑台训练是抑制了LC3B、Beclin 1蛋白的表达,可能通过调控JNK相关通路,进而抑制神经元的过度自噬,促进脑损伤后对神经元的保护。
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