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杏(Armeniaca vulgaris Lam.)系蔷薇科(Rosaceac)杏属植物。杏原产于我国,种质资源极为丰富,是中国栽培历史最久的果树之一。但由于春季低温和晚霜,常使花芽、花,甚至幼果受冻,产量和经济效益受到极大的损失,因此选育抗寒性强的品种有重要意义。近十几年来,国内外迅速发展的转基因技术已经在育种中得到了广泛的应用,并且已经取得了长足发展,转基因技术已经成为改良品种最有前途的技术方法之一。花粉管导入法在农作物上取得了令人鼓舞的成绩,但是在果树上应用的研究却极少,由于果树育种周期长,不断地摸索试验快速有效的育种方法是很有意义的。本研究对杏进行了抗寒基因转化试验研究,并成功将沙冬青抗寒基因AmEBP1通过花粉管成功转化入岱玉杏T0代中,并对组培苗进行生理指标测定,其主要研究内容如下:1.岱玉杏×凯特杏杂交亲和,坐果率达到57%,果实横径、纵经、侧径可达4.081cm,4.403cm,4.412cm,均高于自然授粉的岱玉杏,表现出现杂种优势。不同处理导入DNA对转化率有一定影响,切除1/2柱头滴注外源DNA能提高转化率,但对坐果率有一定影响;花粉基因处理的坐果率较正常花粉坐果率下降9.5%;2.采用不同浓度DNA导入对转化率有一定的影响,当DNA浓度分别为200μg/mL、500μg/mL、800μg/mL时,坐果率分别为21.5%、26.4%、12.7%,坐果率没有随着外源DNA浓度高低而逐渐升高或降低,而是以500μg/mL的浓度相对比较高,3个DNA浓度处理的坐果率远低于对照;导入DNA浓度在500μg/mL时,切除花柱1/2时转基因成功率最高,在第7天时能达到75%,60天后为30%,但基因导入后随时间的延长,阳性比率仍然出现下降的趋势,说明基因丢失仍然存在。3.采用改良的WPM培养基,对岱玉杏不同胚发育时期培养结果得出,在改良WPM培养基上,PF值高于0.3时才能形成愈伤,附加激素BA在0.6 mg/mL-0.8 mg/mL时,愈伤诱导率最高,在PF=0.7时成苗率最高;成熟胚在MS和改良WPM上均能萌动,但有叶小、卷曲、畸形、或玻璃化,根芽生长不良的情况出现。4.在对岱玉杏,大果杏,凯特杏,金太阳4个品种成熟胚培养结果表明,低温处理的时间和4个品种杏的萌发呈现正相关,随着低温处理时间的延长,4个品种杏的萌动迹象越发明显,成苗率都有提升。大果杏在处理60天后,大田出苗率基本可以达到100﹪,是最易成苗的品种。岱玉杏无论种胚腐烂率很高,在60﹪以上。5.本研究得到岱玉杏转基因苗木。16株经过PCR检测阳性,Southern杂交检测有11个分别出现1-3条杂交带,另一个转基因植株中只出现了微弱的杂交带,证明AmEBP1基因已经整合到T0代组培苗中。6.通过对转基因株系与未转基因株系组培苗抗寒生理对比,转基因株系(组培苗)LT50为-4.37℃<对照-4.12℃;SOD、POD活性与可溶性蛋白含量在-5℃到-10℃之前达到最大值,总体均有先升后降的趋势,并有转基因高于对照组的;游离脯氨酸含量总体上均呈现“上升”的趋势;随着温度的降低MDA含量增加,-5℃之后转基因植株增幅速率明显低于对照。7.试验饲喂转基因杏果后,鸡群与羊群没有明显病症,测量血常规得出对照组与转基因组血液中红细胞数、白细胞数、血红蛋白量、红细胞压积、淋巴细胞比率,其指标值均无显著差异(P>0.05),并未对动物造成病害。