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目的:探讨联合应用十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(Sodiumdeoxycholate)的化学萃取方法,对异种神经移植段进行脱细胞处理,构建异种神经去细胞基质膜管,应用于修复周围神经缺损的可行性。
方法:取新鲜兔坐骨神经,切成长10mm的神经段,用十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(Sodiumdeoxycholate)反复处理新鲜的兔神经段,去除神经的轴突,髓鞘等细胞成份,构建成异种神经去细胞基质膜管。实验动物为健康成年SD大鼠,雌雄不限,体重200~250g,实验分组为30只SD大鼠,随机分为3组,每组10只。实验组用异种神经去细胞基质膜管修复,对照组为硅胶管桥接组和自体神经移植组。3组均修复10mm长坐骨神经缺损,术后4个月分别观察3组大鼠的足跟溃疡时间、步态、关节活动情况,测量计算坐骨神经指数(sciaticnervefunctionindex,SFI),测量坐骨神经动作电位幅度和传导速度,利用图像分析系统计算各组的再生神经纤维数目及再生的神经纤维直径,并行常规苏木精-伊红(HE)染色和S-100免疫组织化学染色(SABC法)观察神经再生情况及髓鞘再生情况,透射电镜观察再生神经轴突和髓鞘的超微结构。
结果:4个月时可见异种神经基质膜管与大鼠坐骨神经缝合处愈合良好,吻合口光滑,未见有神经瘤形成,也未与周围组织有粘连及排斥反应发生,HE染色显示异种神经基质膜管组桥接处再生神经结构连续性良好,移植段可见大量神经纤维通过,周围同时可见新生的血管。S-100免疫组织化学染色可见阳性的雪旺氏细胞沿神经纤维分布成条带状。电镜超微结构观察可见再生的神经纤维较粗大,排列紧密,呈均匀一致圆型或椭圆型,髓鞘较厚,轴突结构完整。坐骨神经指数(SFI)结果:1个月时异种神经基质膜管组SFI与硅胶管组相比,差异没有统计学意义(P>0.05),与自体神经移植组相比,差异没有统计学意义(P>0.05);2个月时异种神经基质膜管组SFI与硅胶管组相比,差异没有统计学意义(P>0.05),差于自体神经移植组,差异有统计学意义(P<0.05);3个月时异种神经基质膜管组SFI优于硅胶管组,差异有统计学意义(P<0.01),差于自体神经移植组,差异有统计学意义(P<0.05);4个月时异种神经基质膜管组SFI优于硅胶管组,差异有统计学意义(P<0.01),与自体神经移植组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。电生理检测结果:异种神经基质膜管组坐骨神经的传导速度优于硅胶管组,差异有统计学意义(P<0.05),差于自体神经移植组,差异有统计学意义(P<0.05)。异种神经基质膜管组坐骨神经的动作电位幅度优于硅胶管组,差异有统计学意义(P<0.05),与自体神经移植组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。图像分析再生神经纤维数目和直径结果:异种神经基质膜管组的再生神经数目多于硅胶管组,差异有统计学意义(P<0.01),与自体神经移植组相比,差异没有统计学意义(P>0.05)。异种神经基质膜管组的再生神经纤维直径大于硅胶管组,差异有统计学意义(P<0.01),小于自体神经移植组,差异有统计学意义(P<0.01)。
结论:联合应用十二烷基硫酸钠(Sodiumdodecylsulfate,SDS)和脱氧胆酸钠(Sodiumdeoxycholate)的化学萃取方法构建的异种神经去细胞基质膜管可以修复大鼠坐骨神经缺损。