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目的:测定EAE小鼠脑和脊髓中β-arrestin1以及CAMP、PKA、CREB的蛋白含量变化,通过益肾解毒通络法的干预,比较蛋白含量变化前后EAE的发病程度,综合分析益肾解毒通络法对EAE小鼠的调节机制。
方法:选用6-8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为6组:空白组、模型组、中药组、激素组、AAV干扰组、 AAV干扰加中药组,每组10只,建立EAE模型。在免疫后第7天给予模型组、空白组、AAV干扰组生理盐水灌胃,激素组给予醋酸泼尼松混悬液灌胃,中药组、AAV干扰加中药组给予中药复方益肾达络饮灌胃,持续14天,第22天取材,取出脑和脊髓。最后采用Western Blot方法检测各组小鼠脑和脊髓中β-arrestin1、CAMP、PKA、CREB蛋白表达含量。
结果:1.从小鼠的体重测量结果得知空白组小鼠情况平稳,体重缓慢增加。其他五组在免疫第二天体重急剧下降。模型组体重降低幅度最显著。从小鼠的神经功能评分得知发病初期,五组小鼠均先出现尾尖下垂,步态改变,在造模第9-15天,模型组小鼠体重呈明显下降趋势,发病程度最严重,已经出现尾巴根部完全无力,弓背明显,后肢或双后肢无力甚至瘫痪,间歇性跛行,皮毛色泽减退,精神萎靡不振,大便溏,神经功能评分最高达到4分,平均分达到3.81分。与模型组相比,中药组小鼠在造模第7-14天,小鼠体重未减轻,症状以尾尖下垂、步态改变、后肢或双后肢无力、间歇性跛行为主,中药组神经功能评分最高分2.55分,最低平均分1.83分。AAV干扰组小鼠在造模第七天注入腺相关病毒后,体重呈缓慢增长趋势,起初其神经功能评分略低于中药组,但在免疫第14天后,AAV干扰组的神经功能评分高于中药组,低于模型组。AAV干扰加中药组与中药组相比,无显著性差异。中药组与激素组相比,无显著性差异。
2.βarrestin1蛋白在小鼠脑和脊髓中,模型组的表达量最高,模型组>AAV干扰组>中药组、激素组、AAV干扰加中药组;模型组小鼠脑和脊髓中CAMP、PKA、CREB蛋白表达均低于其它五组。
结论:1.βarrestin1蛋白表达与EAE小鼠发病呈正相关,益肾达络饮的使用可以有效降低βarrestin1蛋白的表达。
2.益肾解毒通络法秉持“益肾、解毒、通络”的治疗原则,在一定程度上能够增加EAE小鼠体内CAMP、PKA、CREB蛋白表达,减缓由CD4+T细胞介导的以脱髓鞘为特征的EAE发病状态。
方法:选用6-8周龄C57BL/6雌性小鼠随机分为6组:空白组、模型组、中药组、激素组、AAV干扰组、 AAV干扰加中药组,每组10只,建立EAE模型。在免疫后第7天给予模型组、空白组、AAV干扰组生理盐水灌胃,激素组给予醋酸泼尼松混悬液灌胃,中药组、AAV干扰加中药组给予中药复方益肾达络饮灌胃,持续14天,第22天取材,取出脑和脊髓。最后采用Western Blot方法检测各组小鼠脑和脊髓中β-arrestin1、CAMP、PKA、CREB蛋白表达含量。
结果:1.从小鼠的体重测量结果得知空白组小鼠情况平稳,体重缓慢增加。其他五组在免疫第二天体重急剧下降。模型组体重降低幅度最显著。从小鼠的神经功能评分得知发病初期,五组小鼠均先出现尾尖下垂,步态改变,在造模第9-15天,模型组小鼠体重呈明显下降趋势,发病程度最严重,已经出现尾巴根部完全无力,弓背明显,后肢或双后肢无力甚至瘫痪,间歇性跛行,皮毛色泽减退,精神萎靡不振,大便溏,神经功能评分最高达到4分,平均分达到3.81分。与模型组相比,中药组小鼠在造模第7-14天,小鼠体重未减轻,症状以尾尖下垂、步态改变、后肢或双后肢无力、间歇性跛行为主,中药组神经功能评分最高分2.55分,最低平均分1.83分。AAV干扰组小鼠在造模第七天注入腺相关病毒后,体重呈缓慢增长趋势,起初其神经功能评分略低于中药组,但在免疫第14天后,AAV干扰组的神经功能评分高于中药组,低于模型组。AAV干扰加中药组与中药组相比,无显著性差异。中药组与激素组相比,无显著性差异。
2.βarrestin1蛋白在小鼠脑和脊髓中,模型组的表达量最高,模型组>AAV干扰组>中药组、激素组、AAV干扰加中药组;模型组小鼠脑和脊髓中CAMP、PKA、CREB蛋白表达均低于其它五组。
结论:1.βarrestin1蛋白表达与EAE小鼠发病呈正相关,益肾达络饮的使用可以有效降低βarrestin1蛋白的表达。
2.益肾解毒通络法秉持“益肾、解毒、通络”的治疗原则,在一定程度上能够增加EAE小鼠体内CAMP、PKA、CREB蛋白表达,减缓由CD4+T细胞介导的以脱髓鞘为特征的EAE发病状态。