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鸡传染性支气管炎(Infectious bronchitis, IB)是由传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus, IBV)感染鸡,引起的一种急性、高度接触性传染病,主要造成雏鸡大量死亡,蛋鸡产蛋量和蛋品质下降,肉鸡饲料转化率降低等严重危害。此外,IBV易发生基因突变和重组,导致抗原漂移和抗原转换。不同IBV血清型之间交叉保护性较低,以致选用的疫苗若与地方流行毒株血清型不同而导致免疫失败,且IBV易引起其他病原微生物的混合感染。因此,本研究以天然免疫防御中重要的多功能小分子多肽(禽β-防御素)为研究对象,探讨天然免疫对病毒的防御作用,期望从提高天然免疫的角度,找到抗IBV感染的新途径。禽β-防御素(Avian beta defensins, AvBDs)为富含阳离子的小分子多肽,是禽类先天性免疫系统的重要组成部分,是抵御病原微生物入侵的重要屏障。本试验采用滴鼻点眼法,选用IBV强毒CK/CH/LHLJ/04V P3、IBV弱毒CK/CH/LHLJ/04V P110分别接种15日龄雏鸡5只,作为攻毒组；另留5只未处理的雏鸡作为对照组。攻毒3日后,采集攻毒组和对照组15种组织器官。用荧光定量PCR法分别检测采集样品中,AvBD1-13、10种鸡Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)的表达量。结果表明经IBV诱导后,鸡AvBD2、6、12基因在多数被检组织中的表达量变化差异显著,因此选用大肠杆菌对其进行原核诱导表达,并进一步检测了这3种重组蛋白的抗IBV等生物学活性及安全性。试验结果表明：(1)荧光定量PCR检测结果表明,AvBD1、2、4、5、6、9经IBV弱毒诱导后在被检测组织中表达量普遍下调,而经IBV强毒诱导后在大部分被检测的组织中的表达量显著上调；AvBD10经IBV强弱毒诱导后的变化与上述变化相反；经IBV强弱毒分别诱导后,在被检测的大部分组织中的AvBD3、11、12、13表达量普遍上调(P<0.05)。经IBV强毒株诱导后,所检测的TLRs和iNOS的表达量普遍上调；IBV弱毒诱导后,TLRs和iNOS的表达量在大部分被检测的组织中普遍下调。(2)经IBV强、弱毒株诱导后,鸡AvBD2、6、12基因在多数被检组织中的表达量变化显著,因此选择鸡AvBD2、进行原核诱导表达,获得的三种重组蛋白分子量为10-15ku,均以包涵体形式存在。体外抗病毒试验结果表明,三种重组蛋白对IBV具有显著的杀灭作用,AvBD6、12对病毒在鸡胚尿囊液中的增殖具有抑制作用。(3)采用菌落计数法检测的结果显示,与阴性对照相比,三种重组蛋白对大肠杆菌、鸡白痢沙门氏菌、四链球菌和枯草芽孢杆菌均有显著的抑制作用(P<0.05)；仅重组鸡AvBD12蛋白对金黄色葡萄球菌有抑制作用(P<0.05)。三种重组蛋白具有盐离子浓度依赖性,随着氯化钠浓度的升高,对大肠杆菌和四联球菌的抗菌活性显著下降(P<0.05)。重组鸡AvBD12蛋白对猪霍乱沙门氏菌、兔波士杆菌和嗜酸乳杆菌有不同程度抑制作用；在高盐浓度下,该蛋白对金黄色葡萄球菌和兔波士杆菌仍具有抑菌活性。(4)三种重组蛋白溶血活性极低,与阴性对照相比无显著差异(P>0.05)。综上所述,鸡AvBD2、6、12具有广谱抗细菌和IBV的作用,且对鸡血红细胞无明显毒性。由防御素介导的天然免疫存在于鸡的多种组织器官中,IBV可能刺激并调节鸡体内AvBDs mRNA的表达。这些结果表明病毒粒子直接介导鸡AvBDs的部分抗病毒作用。这些肽类对病原(IBV)识别和启动对病原微生物免疫反应可能具有一定作用。目前研究仅检测鸡p-防御素的mRNA,而这些肽类将通过ELISA方法在今后的研究中进一步检测。